Bonjour à tous !
Je souhaiterai avoir si possible des informations sur le principe et le fonctionnement du microscope confocale à balayage laser qui je dois le dire restent assez flous pour moi...
Merci d'avance pour toute réponse ou indication
Salut, bah de ce que j'en comprends perso, en modifiant la focale du microscope, on peut photographier des images à différents niveaux de profondeur, puis que l'on recombine par ordinateur pour obtenir une image 3D..Il me semble, après je n'ai pas vraiment de connaissances sur le sujet..Bonne recherche
Les microscopes optiques classiques ont un " grande " profondeur de champs, donc ce qui ne se trouve pas dans le plan focal est flou..Ici, on réalise des photographies de très faibles profondeur de champs ( donc vraiment niveau par niveau ), et je crois que ce qui le permet est justement le fait d'utiliser un laser qui éclairera uniquement ce qui se trouve dans le plan focal, contrairement à la lumière blanche du microscope optique qui traverse tous les niveaux de profondeur de l'objet.. Je suis loin d'être un expert, donc ne te fie pas forcément à 100% à ce que je dis, mais c'est ce que j'en comprends en tout cas..Bonne recherche à toi
ah tout d'abord merci pour tes réponses !
donc si j'ai bien compris il s'agit simplement d'un type de microscopie à résolution plus grande car on se focalise sur certaines parties de l'échantillon qu'on va ensuite "réassembler"?
Hum, bah je suis pas assez calé en optique pour utiliser le terme de résolution..J'aimerai quand même bien que quelqu'un vienne valider ou non ce que je dis, mais oui, ce que j'en comprends, c'est que ayant une faible profondeur de champs, une photographie unique nous permet d'avoir une image sur un plan unique, c'est à dire sans avoir l'image floue de ce qui se trouve devant et derrière ce plan. En prenant plusieurs de ces photos à différentes profondeur, il ne nous reste plus qu'à les assembler pour obtenir une image nette en 3D..Le Laser doit servir en ce sens qu'il nous permet d'éclairer uniquement le plan qui nous intéresse, contrairement à la lumière du microscope optique qui traverse toute la préparation.. Mais voilà, à confirmer, désolé !
Salut
En fait un microscope confocal à balayage est uniquement capable d'évaluer le luminosité en un "point" de l'espace (voxel). Chaque mesure de l'intensité lumineuse se fait généralement avec une caméra CCD, cette mesure donne la valeur d'un pixel de l'image. Il faudra donc balayer la surface (disons le plan X-Y), puis changer de couche (disons sur l'axe Z). Pour chaque couche, les valeurs de tous les pixels sont mesurées, stockées, puis réassemblées, afin de former l'image. Il n'est donc pas possible de voir une image en temps réel, comme avec un microscope optique traditionnel.
En ce qui conerne la résolution, il faudra faire un compromis entre celle-ci et l'intensité lumineuse obtenue. La sélection de la couche Z se faisant avec un pinhole (sténopé), le diamètre de celui-ci conditionne la résolution axiale (épaisseur de la couche Z). Alors que la résolution latérale est conditionnée par l'objectif.
L'excitation se fait sur toutes les couches, mais elle sera plus concentrée sur la couche voulue, car la lumière du laser passe à travers le même objectif que la lumière émise par l'échantillon (la lumière du laser est réfléchie par un miroir dichroïque, alors que la lumière émise passe à travers). Je ne suis pas sûr par contre du nombre de balayages par pixel qu'il faudra réaliser. Si on n'est intéressé uniquement par une couleur, un balayage par voxel suffit. Sinon, cela dépendra probablement des longueurs d'onde des lasers et celles émises par l'échantillon et des miroirs dichroïque à disposition.
Gordak
Waw, ça a l'air assez complexe comme système ! En gros si j'ai bien compris, ça ne prend pas la " photographie " de tout un plan à la fois, mais seulement d'un point du plan, il y a donc un balayage latéral pour obtenir une image de chaque point du plan( x ; y ) et ceci sur différents niveaux verticaux ( z ), pour obtenir tous les points, de tous les plans..
C'est ça.
Pour prendre des images, il faudra bouger l'échantillon (ou le système optique) sur de très petites distances (sous le micron). Ceci limite aussi la résolution, puisqu'il faut des systèmes très précis pour bouger rapidement et précisément le système optique par rapport à l'échantillon. Ce genre de système est encore en développement, mais devrait permettre d'améliorer la prise d'images par la suite.
Gordak
en fait, pour le balayage X-Y, l'échantillon est fixe et est balayé par le laser.
pour les coupes en Z, c'est la lame qui bouge avec un système piézo electrique qui permet des résolutions inférieures au micromètre.
Je pense avoir compris l'essentiel, merci beaucoup pour toutes vos réponses
merci pour ta question, je ne connaissais pas non plus !!
