Bonjour à tous,
J'essaye de comprendre cette technique (AFLP) et d'après ce que j'ai lu : l'ADN génomique est digéré par deux enzymes. Des adaptateurs sont ajoutés aux extrémités des sites de restriction. Les amorces peuvent ensuite se fixer sur les fragments obtenus et ceux-ci sont amplifiés. La PCR peut être réalisée en plusieurs étapes : une première avec des amorces dont la séquence est identique à celle des adaptateurs et qui amplifie ainsi tous les fragments ; la seconde avec des amorces possédant de 1 à 3 nucléotides supplémentaires en 3’ sélectionnant ainsi un plus petit nombre de fragments étant donné que ceux ci peuvent être très nombreux.
c'est cette dernière étape que j'ai mal compris. Quelqu'un pourrait-il m'éclairer ?
Une autre petite question: dans un article il utilise cette technique pour identifier un gène (ou du moins son locus) en comparant les profils AFLP du mutant pour ce gène VS les profils des wild type. d'accord mais ensuite pour interpréter ? S'il n'y a pas de recombinants entre quelques AFLP et le gène mutant c'est que le gène se trouve au niveau de cette région chromosomiques. Mais je n'arrive pas à contextualiser, comment sait-on que tel AFLP correspond à cette région génomique précise ?
Je sais pas si c'est très clair... Mais merci d'avance pour votre aide. Bonne journée à tous.
Cécile
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