électrophorèse: pk plusieurs fragments

[invite73b7ce37]

Bonjour les jeunes!

Nous avons fait une purification de plasmide. D'après les absorbances, mon plasmide a été super bien purifié.

Toutefois, sur le gel d'agarose, j'obtiens 2 fragments pour le plasmide purifié NON digéré (g tout compris pour le digéré, forme linéaire, marqueur de taille etc...)

Je ne comprends pas:
- ce que veut dire le fait d'avoir plusieurs fragments pour le non digéré (est ce que ça veut dire qu'il y a contamination?)
- est-ce qu'on peut directement déterminer la forme de chaque fragment (enroulé linéaire ou surenroulé), juste en comparant les distances parcourues.

Ce que je trouve bizarre, c'est que si on peut avoir plusieurs formes de plasmides, pourquoi est ce que dans les puits de mes camarades, on retrouve exactement les mêmes fragments, à la même distance... et ils en obtiennent 2 aussi, comme moi...

Merci!
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[inviteb79b6ae1]

Bonjour,

Première chose, si tu es en présence des fragments de plasmide ils sont nécessairement linéaires. Ensuite tu peux avoir un plasmide circulaire et super enroulé qui font que tu as deux bandes très hautes sur ton gel. Pourrais tu nous donner la taille de ton plasmide théorique et celles des deux bandes que tu observes. Enfin pourrais tu nous dire dans quelle souche se trouve ton plasmide et comment l'as tu purifié.

RwG