Bonjours à tous,
Dans le cadre des TIPE je cherche à mettre en évidence la communication inter-batérienne chez Myxococcus Xanthus.
Pour cela je cherche à connaitre des colorations vitales utilisables sur des bactéries et observables au microscope optique non fluorescent (donc pas de BrdU). J'ai besoin de colorer de deux façons les souches.
Si vous avez des idées n'hésitez pas
Merci
tu peux utiliser la coloration de gram pour voir si elles sont gram+ ou gram-,pour effectuer cette coloration il te faut:
-du cristal violet:laisse reposer sur la lame pendant 1 minute
-du lugol :laisse reposer pendant 1 minute
-tu met de l'alcool acétone
-une fois que tu as mis l'alcool acétone sur la lame,tu met de la safranine que tu laisse reposer pendant 2 minutes sur la lame
-tu rince abondamment avec de l'eau puis tu n'a plus qu'à regarder au microscope
Les bactéries qui deviennent violettes sont gram+ et les bactéries qui deviennent rose sont gram-;les clostridium perfringens sont des bacilles gram+.
j'espère que ceci pourra t'aider
Tu peux aussi utiliser la coloration de zihel :
voici le protocole:
1er temps : coloration par la fuchsine à chaud
On recouvre le frottis d'un papier filtre imprégné de fuchsine de Ziehl.
Chauffage à émission de vapeur pendant dix minutes au moins, en veillant à ne pas laisser sécher le papier. Rinçage à l'eau distillée stérile.
2e temps : décoloration
Trempage de la lame deux minutes dans une solution d'acide, suivi d'un rinçage.
Trempage de la lame cinq minutes dans l'alcool à 90°, suivi d'un rinçage.
3e temps : recoloration
On recouvre la lame pendant deux minutes d'une solution de bleu de méthylène, puis on rince.
on parle de coloration VITALES, donc qui se font sur matériel vivant. La coloration de Gram et Ziehl se font sur bactéries fixées...
Tu as raison mais la coloration de ziehl permet de colorer les mycobactéries
Tout dépend de la nature des molécules à mettre en évidence : peptides ? polyosides ? lipides ?
Bonjours à tous,
Merci de vos réponses mais comme la dit Flyingbike la question portait sur des colorations vitales...
Malheureusement le sujet a été abandonné mais il aurait était question de peptide (pour répondre à noir_écaille).
A bientôt
Victor
A priori les colorations vitales utilisent peu ou prou les mêmes colorants que les colorations classiques, mais à une dilution du 1/5.000 au 1/50.000 pour en atténuer la toxicité.
Pour colorer des peptides/protéines, on a :
- Acide phosphotungstique
- Éosine Y
- Éosine classique
- Orange G
- Bleu de méthyle
- Bleu de méthylène
- Bleu Brillant FCF
- Fuchsine acide à ne pas confondre avec la Fuchsine alcaline (plutôt pour des fonctions aldéhydes)
- Orcéine
- Pourpre de Biebrich
- Immunocoloration
...
Si frottis, utiliser de préférence avec un colorant de contraste type :
- Hématoxyline
- Ponceau 2R
...
Merci pour ces réponses noir_ecaille. Je m'en vais les étudier de ce pas
A bientôt
Victor
