bonjour tout le monde,
je cherche svp un protocole complet de l'étude histologique avec les détails (du genre durée et tout) !! je sais que sur les articles publiés, on ne donne pas ce genre de détails !! ou au cas échéant un lien ou un livre disponible sur le net pour m'aider à faire mon protocole !!
Merci beaucoups !
Bonjour,
Qu'est ce qu'une étude histologique pour toi? Une simple coloration des tissus avec H&E? Une immunohistologie? immunohistochimie? Les trois ensemble?
Tu cherches à observer l'organisation d'un tissu? L'expression d'une protéine faiblement exprimé dans un tissu? ou les deux?
Avant de commencer un protocole, il faut fixer des objectifs clairs à atteindre.
Je peux normalement t'aider, vu que j'ai fait un paquet d'immunohistochimie et de coloration H&E, mais il me faut plus de détails
Comme le matériel de départ (coupe en parafine, par exemple), l'objectif à visualiser...
Pour moi, une étude histologique est l'étude de l'organisation d'un organe/tissu d'un organisme "sain" vis-à-vis d'un organisme "essai" ou "malade".
Merci biseibutsu pour ton aide, ce que je cherche c'est effectivement observer l'organisation d'un tissu d'un organisme traité comparée à ce d'un organisme sain !!
matériel de départ : coupes de paraffine pour une coloration H&E !
Mais ce que je recherche c'est tous les détails, depuis l'immersion dans le formol jusqu'à l'observation au MO !!
Merci confrère !!
Voilà, j'ai juste fait un copié-collé de mon vieux proto. Les coupes ont été réalisés avec un microtomes, 3µm d'épaisseur, déposé sur une lame en verre, puis séchés à température ambiante.
Après la réalisation des coupes, on effectue une coloration H&E, qui consiste à colorer les tissus avec de l’hématoxyline, puis avec de l’éosine, afin de mettre en évidence les structures histologiques.
Le protocole utilisé est le suivant :
- Déparaffinage des lames 2 fois 5 min dans du xylène
- Réhydratation des tissus par passage dans des bains successifs (5 min) d’éthanol 100%, 95%, 70% et eau distillée
- Coloration 5 min à l’hématoxyline
- Rinçage à l’eau du robinet pendant 5-10 min
- Coloration 2min30 à l’’éosine (le temps de coloration peut être ajusté pour avoir l’intensité, le contraste… désiré, et suivant le type de tissu)
- Déshydratation des tissus dans des bains (5 min) d’éthanol de 70%, 95%, 100% et enfin xylène
- montage lame-lamelle dans du milieu de montage non aqueux (Permount).
Les noyaux sont ainsi colorés en violet-bleu, tandis que le cytoplasme est coloré en rose. Cette coloration permet une analyse histologique des tissus, ainsi que le repérage et l’identification des lésions. Cette analyse est effectuée avec un pathologiste, qui classifie en même temps le type de lésions (dans mon cas).
Je joint en plus une image obtenues avec ce protocole. C'est un tissu de prostate de souris cancéreux à 40x.
En espérant que j'ai pu répondre à tes questions!
Merci mon frére, tu m'as beaucoup aidée, c'est très gentil à toi !
Bon courage !!
