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determination de l'activité xanthine oxydase dans le foie



  1. #1
    biloumimi

    determination de l'activité xanthine oxydase dans le foie


    ------

    Bonjour à tous

    j'aimerai solliciter votre aide
    je voudrai determiner l'activité xanthine oxydase dans le foie des souris, je vous explique briévement le protocol avant de vous exposer le problème que j'ai rencontré.
    le foie récupéré est broyé ensuite mis dans un tampon de lyse et l'activité xanthine oxydase est mesurée dans un mélange réactionnel contenant la xanthine, le tampon et HCl qui est rajouté aprés 10mn pour stopper la téaction. L'absorbance d'acide urique qui est le produit de la xanthine oxydase est suivie à 292nm.
    la quantité de protéine dans le foie est mesurée selon la méthode de bradford.
    en utilisant les Absorbance spécifique à l'acide urique produite pendant les 10mn de réaction comment calculer l'activité spécifique de cette protéine en nmol d'acide urique/min mg de proteine

    -----

  2. #2
    sebastien_cha

    Re : determination de l'activité xanthine oxydase dans le foie

    Bonjour,
    L'activité spécifique de ta protéine qui est une enzyme correspond aux micromoles de produits apparu par minute et par mg de protéines de départ U/mg.
    Pour le calculer on part de l'activité enzymatique qui sont les micromoles de produits formés par minutes et par ml de protéines et de la concentration en protéine en solution (mg/ml):
    Activité Spécifique = Activité Enzymatique / Concentration

  3. #3
    biloumimi

    Re : determination de l'activité xanthine oxydase dans le foie

    merci pour votre réponse, vous me dites SVP si je suis sur la bonne voie.
    pour calculer la concentration de l'acide urique produite par minute on divisera l'absorbance par le coefficient d'extinction molaire de l'acide urique divisé par 10mn. donc on aura la concentration en mmolaire/l mn multiplié par le volume de l'échantillon.

    en parallele je calcul la quantité de protéine présente dans l'échantillon par le bradford (BSA comme standard).

    merci pour beaucoup

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