Plasmide ligature

[invitef1648d69]

Bonsoir à tous, je prépare mes examens en Bio et dans un exercice je ne comprend pas une question;
les questions precedentes portent sur la coupure par BgIII d'un fragment d'adn, de la digestion d'un plasmide avec BamH1, et de la sequence obtenue apres ligation au niveau des jonctions vecteur/insert et insert/vecteur. la question est : Ces jonctions peuvent elles etre recoupées par BamH1 et/ou BgIII?
Je ne vois absolument pas comment répondre, logiquement oui elles peuvent recoupées car les jonctions sont des sequences auxquels correspondent les enzymes BamH1 et BgIII, mais ca me semble bizarre... Y a t il un élément de cours qui m'echappe? Merci beaucoup d'avance et bonne soirée a tous !
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[Loupsio]

Bonsoir,
Le mieux pour répondre a ce genre de question c'est de faire le schéma de ton insert digéré, (ce a quoi il est censé ressembler après coupure) et pareil pour ton plasmide

ensuite tu fais un schema associant les deux et tu regardes si tu retrouve tes séquences de restriction

[invitef1648d69]

C'est ce que jai fais car ce sont les questions précedentes et oui on retrouve les sites de restrictions, il suffit juste donc de faire ca? Ca me semble trop simple ^^

[invitebba2dde3]

Bonjour,
ce qui m'étonne c'est que tu coupe ton ADN avec une enzyme et ton plasmide avec une autre. Normalement les bouts collants ne peuvent pas se linéariser comme cela.
Maintenant la ligation est peut être réalisée en bout franc et donc ne tient pas compte des digestions qui ne servent qu'a définir l'emplacement. Dés lors on ne pourra pas redigérer le plasmide reformé avec les mêmes enzymes !

[A voir en vidéo sur Futura]

[Loupsio]

Il est préférable d'utiliser les mêmes enzymes, mais il arrive (comme c'est le cas avec BamHI et BgIII) que les bord dépassants soient complémentaires,
c'est surtout utilisé quand on ne veut pas que cet endroit soit ré-ouvert car après ligation le mélange des deux ne peut être réattaqué par ces 2 enzymes

BgIII
A.......... GATCT
TCTAG...........A

BamHI
G...........GATCC
CCTAG...........G

melange:
GGATCT
CCTAGA
ceci ne correspond ni a BamHI ni a BgIII
bonne journée

[invitee8e40fa4]

Bonjour,

effectivement, certaines enzymes de restriction générant des extrémités protrusives (par franches = blunt) peuvent être cohésives. Dans ce cas, généralement on ne peut pas recouper avec les 2 enzymes utiliser au début. Si tu peut trouver un livre de NEB (New England Biolabs) ou peut être sur leur site, tu as un tableau qui récapitule tout : enzyme X est compatible avec enzyme Y, ... Ensuite on peut recouper avec enzyme Z, ...