congélation de Neisseria gonorrhoeae

[invite59cd5afa]

Bonjours,

voici mon petit problème : je souhaite conserver une souche de Neisseria gonorrhoeae afin de pouvoir l'utiliser en tant que souche contrôle pour des tests de qualité en routine.

j'ai essayé dans un premier temps de la congeler sur cryobille (en suivant les recommandations du fabriquant), problème : la souche n'a pas survécu...

Alors j'ai fait à ma manière : toujours sur cryobille, sauf que j'ai d'abord ensemencé un bouillon, fait maison à base de chocolat+PVX et d'eau stérile, avec la souche puis j'ai placé ce bouillon dans le tube contenant les cryobilles à la place du liquide cryoprotecteur. Le tube a été incubé 24h à 37°C en atmosphère enrichie en CO2. Ensuite il est resté 20min à température ambiante puis 20min au réfrigérateur à 4°C et enfin au congélateur à -20°C. Et de nouveau : la souche n'a pas survécu

Pour corser un peu les choses : je n'ai pas de congélateur à -80°C, pas de possibilité de lyophiliser la souche et pas de glycérol à disposition.

Est ce que vous connaissez un moyen de conserver cette souche au congélateur ?

Merci !!
-----

[Flyingbike]

pourquoi ne pas acheter du glycérol déjà ?

[invite59cd5afa]

Je ne suis pas en métropole et le glycérol met plus de 2 mois à arriver au labo entre le moment où il est commandé et le moment où on le reçoit. Mon stage ne durera pas assez longtemps pour l'obtenir...

[invitee5843a79]

pourquoi ne pas faire une gélose ou un bouillon à repiqué toute les 48 a 72 h si ton stage dure moins de deux mois ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite59cd5afa]

Le but est que le labo puisse continuer à faire les contrôles qualités avec cette souche même après mon départ

[Flyingbike]

quel genre de contrôle faites vous ? y a-t-il besoin de la bestiole vivante ?

[invite59cd5afa]

oui il faut qu'elle soit vivante ! je contrôle les milieux de culture utilisés par le laboratoire

[invite59cd5afa]

Bonjours

En fait j'aimerais savoir si le fait de diminuer ou augmenter le temps de congélation/décongélation permettrait peut être de garder la souche vivante ?

Le fabriquant précise qu'une fois le tube ensemencé, la solution cryo-conservatrice doit être retirée puis le tube doit être placé au congélateur. Et pour ensemencer une boite à partir d'une cryobille, il suffit de récupérer une des billes, la faire rouler sur une gélose puis placer dans l'incubateur.

Donc à chaque fois la souche passe de 25°C à -20°C puis de -20°C à 37°C ...

Merci !

[invitee5843a79]

normalement sa ne devrait pas poser de problème puisuqe plus la congelation est rapide (a -20 sa va vite) moins les cristaux de glaces ont de chance d'abimé les paroi aprés passer de -20 a 37 je c pas si sa pose problème mais a priori non

[Flyingbike]

je ne connais que les eucaryotes mais lorsque nous congelons des cellules vivantes, la diminution de la température doit être progressive. Pour cela on utilise un systeme du style Mr Frosty ou simplement on emballe le tube dans plusieurs couches d'essuie tout.