Révisions Biochimie

[invite278ccda1]

Bonjour,
Je suis en deuxième année de bio et je révise mes rattrapages à l'aide des anciens partiel.
J'ai un problème avec un des exercice qui est:
"Un gène codant pour une protéine de 46500 Daltons est cloné dans un vecteur d'expression. Ce vecteur est transformé dans une bactérie où la protéine est surproduite, puis purifiée. Un extrait de protéine purifiée est analysée par spectrométrie de masse et permet d'obtenir un pic unique à m/z=38500 Daltons."
La question c'est pourquoi on à perdu 8000 Daltons dans l'affaire. Je connais le principe de la spectro mais la je buche completement !
Et la deuxième question est:
"Un extrait de cette protéine purifiée est ensuite déposé sur un gel SDS-PAGE, et l'on observe un seule bande à 19 kDa" comment l'expliquez vous?
Alors je sais bien que ce n'est pas un forum pour résoudre mes exercices mais si je pouvais avoir des pistes ce serait fantastique

Merci d'avance
Une pauvre étudiante stréssée
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[TanguyE]

Bonjour,

Pour la première question, il faut te pencher sur les spécificités de la production de protéines recombinantes par les bactéries. Quelles différences dans le process par rapport à une cellule eucaryote pourrait expliquer ces 8000Da en moins?

Pour la seconde question, c'est du côté de la technique qu'il faut réfléchir. Quelles sont les conditions requises pour un gel SDS-PAGE et quels en sont les effets sur les protéines. (petit indice: que représente 19kDa par rapport à 38kDa)

[invite278ccda1]

Bonjour,
Merci de m'avoir répondu
Je n'arrive pas à trouver la première réponse, j'avais pensé que c'était du au fait que dans les organisme procaryote il n'y a pas d'épissage mais je ne pense pas que ce soit ça.
Pour la deuxième question j'avais remarqué que 38/2 =19 mais je ne comprenais pas le lien. Maintenant je pense que la protéine est formé de 2 sous-unité mesurant chacune 19kDa. Est-ce correct?

[TanguyE]

Bonjour,

Pour la seconde question, c'est bien ça.

Pour la première, je vais continuer sur les indices: ça a un rapport avec la maturation des protéines.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite278ccda1]

Bonjour,
Alors pour la première je pense que dans les cellules procaryotes il n'y a pas de modifications post-traductionnel tel que la glycosylation par exemple, donc ici simplement la protéine est replié ce qui lui fait perdre 8000 Da est-ce correct?

[TanguyE]

En effet, c'est l’absence de glycosylation qui pourrait expliquer cette perte de 8kDa

[invite278ccda1]

Merci beaucoup pour vos réponse