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Cellules avec points noirs ? Normal ou pas ?



  1. #1
    Karro

    Cellules avec points noirs ? Normal ou pas ?


    ------

    Bonjour tout le monde !

    Alors, depuis quelques jours, un collègue a observé de nombreux points noirs dans le cytoplasme de ces cellules musculaires lisses de porc. On a d'abord pensé à des mycoplasmes donc on les a testés et c'est négatif. On a aussi fait une coloration au dapi et seul le noyau sont colorés, rien dans le cytoplasme.
    Par contre quand on regarde avec un filtre vert (celui qui fait que c'est vert dans l’oculaire) on aperçoit ces petits points noirs en vert lorsqu'on surexpose (10sec). Ça semble donc être autofluorescent. Après plusieurs observations, on a l'impression que notre milieu de culture (dans les flasks) est sale comme si c'est point noir étaient sécrété par les cellules. (cliquer sur les vignettes pour mieux voir)

    Images supprimées

    Puis maintenant ce sont mes cellules qui font la même chose, mais de façon moins prononcée (moi je travaille avec des cellules musculaires lisses humaines). Est ce que c'était comme ça avant, je ne sais pas, j'y prête attention maintenant puisque mon collègue à eu ce problème.

    Images supprimées

    D’où ma question, ces cellules vous semble-t-elle en santé ? Ou alors avez-vous une idée du problème ?

    Un grand merci par avance pour vos idées !

    -----
    Dernière modification par JPL ; 12/12/2013 à 19h53.
    Karro

  2. Publicité
  3. #2
    JPL

    Re : Cellules avec points noirs ? Normal ou pas ?

    Désolé mais les images personnelles sur un serveur extérieur ne sont pas acceptées. Merci de les poster à nouveau en pièces jointes.
    Rien ne sert de penser, il faut réfléchir avant - Pierre Dac

  4. #3
    Karro

    Re : Cellules avec points noirs ? Normal ou pas ?

    Ah ok, désolée, je savais pas.

    Voila à nouveau les images :
    Celles de mon collègue.

    contraste de phase PSMC.jpgC1-Composite.jpgC2-Composite.jpg

    Et mes cellules à moi :

    1.jpg
    Karro

  5. #4
    Glast

    Re : Cellules avec points noirs ? Normal ou pas ?

    Bonjour,

    J'avais quelques fois le même problème avec des cultures de cellules gliales.
    Antibiotiques ? ça ne marchait pas
    Fongicides ? ça ne marchait pas
    test Mycoplasme : négatif

    Alors on a incriminé la glutamine qui peut provoquer des agrégats.
    En changeant le lot de sérum et le milieu de culture + double lavage au PBS lors des passages, peu à peu ces points noirs ont disparus sans que cela n'affecte mes résultats.
    Le maître montre la lune
    L' idiot regarde le doigt

  6. #5
    biseibutsu

    Re : Cellules avec points noirs ? Normal ou pas ?

    Bonjour,

    Je suis complètement d'accord avec Glast.
    Le sérum a probablement été changé, et c'est probablement un lot qui ne convient pas aux cellules.
    Normalement, lors d'un changement de lot de sérum, on en test plusieurs lots, puis on observe leur effet sur les cellules. Et on choisit celui qui a le moins d’effet (et idéalement pas d'effet du tout).
    Un stress cellulaire peut également provoquer la formation de ces granules (températures non stables, variabilité du pH...). Quoique l'on dise, les cellules sont fragiles (je l'ai appris à mes dépends!).
    Et comme le dit Glast, la meilleur solution est de laisser du temps aux cellules de s'adapter. Mais cela prends généralement plusieurs passage...

    Petit rappel : les mycoplasmes sont invisibles sous microscope optique. Le seul moyen de les détecter, c'est comme tu l'as fait : test myco ou coloration ADN.
    微生物

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Karro

    Re : Cellules avec points noirs ? Normal ou pas ?

    Merci beaucoup pour vos réponses, je vais investiguer tout ca !
    Notre incubateur est vieux et peut être bien que cela vient de ca : températures non stables, variabilité du pH...
    Je vais aussi vérifier au niveau de nos lots de sérum.
    Karro

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