Concentrer un surnageant avant purification

[invitebe112d00]

Salut à tous !

Voilà, ma question est à la fois simple et complexe, j'aimerai savoir quels moyens existent pour concentrer un surnageant après culture cellulaire ?
Pour moi, le moyen le plus efficace (et utilisable à grande échelle) est l'ultrafiltration tangentielle.
Je sais qu'on peut également utiliser l’ultracentrifugation mais je ne sais pas si c'est bien, s'il y a de bons rendements... et puis ma protéine est sécrétée hors de la cellule alors je ne sais pas si ça marche ?
Existe t-il d'autre moyens de concentrer le surnageant avant de le purifier ?

Merci beaucoup !
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[invite54839f53]

Il existe aussi des colones faites justement pour concentrer les surnageants qui s'utilise avec une centri simple ... J'ai dejas aussi lyophilisé des surnageants (freeze-drye) ce qui te permet de recuprer la proteine dans le volume que tu veux ensuite ... perso c'etait pour mettre dans du matrigel et pour assurer la polymerisation du gel je devais limité le volume de liquide a ajouter....

[invitebe112d00]

Merci pour ta réponse Je vais regarder ce que c'est que freeze-drye et voir si je peux l'appliquer dans mon cas!
Est-ce que par hasard tu aurais un peu plus d'infos sur les colonnes dont tu parles (un nom, une marque ou autre) ?
Merci encore

[invite54839f53]

heu je vais pas mettre de marque sur le forum mais une recherche google avec un truc genre "Centrifugal Filters for Protein" et t'auras surement des resultats...

[A voir en vidéo sur Futura]

[TanguyE]

Bonjour,

La meilleure solution reste l'ultrafiltration avec des outils de ce genre: http://www.millipore.com/catalogue/module.do?id=c7715.

Il existe différents fournisseurs, mais les produits sont grosso modo les mêmes, après à toi de choisir le volume et le cut-off (poids moléculaire minimum retenu par le filtre) en fonction de tes besoins.

[invite537c5180]

L´année derniére pour concentrer mes solutions protéiques apres purification j´utilisais du polyethylene glycol ca fonctionnait tres bien