Bonjour, je suis actuellement en stage de M2R dans un laboratoire et je cherche un protocole me permettant d'isoler la fraction cytoplasmique de la fraction membranaire (peut contenir le noyau), sans avoir à passer par une étape d'ultracentrifugation (100 000g). Les centri qui sont à ma disposition ne peuvent monter plus haut que 15 000 rpm et 21 000g Je cherche à démontrer que ma protéine effectue bien un shift du cytoplasme vers la membrane. Merci.
Bonjour,
Question bête certainement, mais pourquoi n'utilises-tu pas de la microscopie à épifluorescence pour montrer que ta protéine est dirigée vers la membrane ?
Et bien mon boss veut que l'on mette au point un protocole rapide que l'on pourrait utiliser en continu et vérifier par western blot la localisation de la protéine. Il s'agit de contrôler où se situe ma protéine après avoir testé l'activité de la B-Gal dans un modèle HeLa dans différentes conditions. Il ne veut donc pas dépendre du plateau imagerie ni de l'ultracentri pour faire les contrôle à chaque manips.
Je ne connais aucun protocole de fractionnement sans ultracentrifugation...
