Comment vérifier orientation d'un insert?

[invitecbb3dd6c]

Bonjour à tous,

alors voilà, j'ai beau tomber sur des questions similaires, j'ai toujours du mal à comprendre comment l'utilisation d'enzymes de restrictions peut nous renseigner sur l'orientation d'un insert dans un plasmide.. J'ai beau chercher des schémas, je n'en trouve pas! Idem pour la vérification à l'aide d'amorces, quelqu'un pourrait-il m'éclairer un peu ce week-end?

Merci d'avance
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[invitecbb3dd6c]

Sinon, juste pour être sur j'ai bien compris :

_ si j'insères un gène avec son promoteur dans un plasmide, peut importe l'orientation, il y aura transcription sur les deux brins du plasmide, donc dans les deux cas le gène sera transcrit.

_ si je l'insère à la suite d'un promoteur déjà présent dans le plasmide, là, forcément, je dois le mettre dans le bon sens, ou il se retrouverait sans promoteur pour initier la transcription.

Mais alors, je ne comprends pas pourquoi on dit que si l'insert est mal orienté, on peut avoir une protéine différente, car je ne vois pas comment la transcription peut avoir lieu si l'insert est mal orienté et sans promoteur.