Western blot- serum humain

[inviteb8ce6858]

Bonjour à tous,
J'ai besoin de votre aide, j'ai envie de mettre en place un protocole pour la révélation d'un blot à partir de plasma humain.
En effet j'ai un antigène de P. falciparum contenu sur une membrane de nitrocellulose, j'aimerai savoir si les anticorps contenus dans du plasma humain reconnaissent cet antigène. Pour cela je dispose de plasma humain, d'anticorps anti IgG humain couplé à de la Phosphatase Alcaline (PA) fait dans la souris. Ma stratégie est: d'incuber dans un premier temps la membrane avec le serum humain puis d'incuber avec les IgG couplé à la PA qui me servira à la révélation. Seulement je ne sais pas comment préparer et à quelle concentration utiliser les plasma humain. Quelqu'un pourrait t-il m'aider pour la préparation des plasmas?
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[invitec9f0f895]

Salut

Malheureusement, je ne vois pas bien comment on pourrait te répondre.
Ta seule solution est de faire une gamme de concentration et de regarder laquelle fonctionne sur ton antigène. Vu que tu n'es pas sur que les anticorps du sérum réconnaissent l'antigène, l'idéal serait d'avoir un controle positif.

YOyo