voilà suite a vos réponses j'ai pu continuer ma manip'. Mes échantillons se déposent bien au fond de mon gel mais lorsque je le visualise sous UV, je n'apercoit qu'une bande et non au moins 2 + un smire.
J'aimerai visualiser mon 23s et 16s.
Avec difficultés j'ai pu voir une deusieme bande mais très faible. Cela pourrait il venir de la concentration trop élevé de mon échantillon de départ (avant extraction de l'ARN) ?
merci
en général quand une bande disparait c'est mauvais signe. Ca veut dire que tes ARNs sont en train de se dégrader.
T'as du smir? (il ne doit pas y en avoir.)
Une bande tout en bas? C'est les ARNs dégradés
sur 10 dépots je vois pour le dernier 1 bande bien vsible tout en haut puis une tres faible juste en dessous puis un smire sur plusieurs cm après. Non rien tout en bas.
Salut
Si tu n'as rien en bas de ton gel il est peu probable que tout se dégrade. Il est possible que tes echantillons soient trop concentrés, essaye de les diluer 10 et 50 fois et redepose sur gel. La derniere fois que j'ai fait ca j'ai vu mes beaux ARNr apparaitre c'etait magique!
Le smear peut aussi provenir d'un probleme de gel et/ou de migration. A l'exception du smear qui se situe entre les deux bandes d'ARNr qui lui correspond aux ARNm. de quel espece extrais tu tes ARN?
YOyo
En tout cas j'acquiesce sur l'orthographe de smear... au risque de me tromper.
Jean-Luc
La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
Salvor Hardin
Salut
Si tu as une bande vraiment tout en haut du gel, c'est peut etre ton ADNg.
Tu deposes bien tes ARNs dans une cuve RNAase free avec du tampon DEPC?
le smear peut aussi venir d'une vitesse de migration trop importante.
Si ce n'est ni la vitesse, ni la concentration, tu ferai mieux de tout jetter et recommencer
A+
Alors merci pour toutes ces reponses.
désolé pour l'orthographe de "smear".
- Je vais essayer de diluer çà lundi et vous tiens au courant.
- En ce qui concerne la cuve je l'ai lavé avec du SDS avant comme indiqué par QIAGEN.En ce qui concerne le tampon c'est celui indiqué sur le protocole QIAGEN.
- Ce sont des bacteries qui proviennent de l'eau.
- pour la vitesse 90V peandant 2 heures classique en faite pour une petite cuve (environ 7-8cm longueur du gel)
merci pour vos reponses. et bon weekend
Je viens de regarder vos profils , je me sens tout petit lol
