Spectre d'émission si lambda(ex)> lambada(max)

[invite82acfce6]

Bonjour,

j'ai une petite question concernant l'allure des spectres d'émission de fluorescence.

Bon, le déplacement de stockes correspond à la différence entre les pics du spectre d'excitation et du spectre d'émission. Imaginons un graphique représentant les deux spectres : si j'excite ma molécule à la longueur d'onde d'excitation maximale, ma molécule émet ensuite toutes les longueurs d'onde du spectre d'émission, et ce à différentes intensités.

Ma question : si j'excite ma molécule à une longueur d'onde supérieure à celle utilisée précédemment, comment sera mon nouveau spectre d'émission, par rapport au précédent? La valeur du déplacement de Stockes est-elle toujours la même?

Mon hypothèse est que ce nouveau spectre aura la même allure, mais il sera moins haut car moins d'intensité. La question est plutôt de savoir si mon spectre sera décalé vers la droite ou pas? Car si il ne l'est pas, cela veut dire que la différence d'énergie entre lambda(ex) et lambda(em) est moins grande qu'avant.. Alors que si il l'est, cela veut dire que lambda(em)max dépend de lambda(ex).

Merci d'avance, si vous cernez ma question ^^
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[invitee4e79868]

Bonjour,

Je pense avoir compris la question. Peut être...

Pour bien expliquer et comprendre, il faut savoir excactement ce qu'est le déplacement de Stockes. Wiki donne une bonne déinition :

Lorsqu'un atome (ou une molécule) absorbe un photon (lumière), il accède à un état électronique excité (i.e. un électron passe à une orbitale d'énergie plus élevée, la différence d'énergie entre son état initial et son état final étant égale à l'énergie du photon absorbé).
Avant de se désexciter, l'atome (ou la molécule) subit une relaxation vibrationnelle, c'est-à-dire qu'il perd un peu d'énergie sous forme de vibration (phonon) ou de chaleur.
Il retourne ensuite à son état électronique initial en émettant un photon d'énergie correspondant à la différence d'énergie entre l'état excité (relaxé) et l'état initial.

Donc, si tu amènes un photon moins énergétique (mais qui peut toujours exciter la molécule cible), l'étape de relaxation va diminuer. Cependqnt, dans la plupart des cas, ce déplacement de Stockes est nécessaire, principalement car il est plus simple d'un peu trop exciter la molécule que juste assez.
J'espère que je suis assez clair...
Pour faire un peu mumuse : http://www.lifetechnologies.com/jp/j...product=A20004
C'est le spectra-viewer d'invitrogen, qui peut permettre de visualiser plus facilement.

[invite82acfce6]

Bonjour, merci pour ta réponse. Ce qui me pose problème, c'est que lorsque l'on place les spectres d'excitation et d'émission sur un même graphique, ils se superposent un peu, de sorte que le photon d'excitation de plus grande longueur d'onde se retrouve au même niveau que le lambda max d'émission.

Donc si j'excite ma molécule avec un des photons de plus grande longueur d'onde sur mon spectre d'excitation, quel impact sur le spectre d'émission? Est ce que ce sera le même, mais avec toute une partie manquante, ou le même mais décalé?

[vpharmaco]

Si tu excites ton fluorophore à une longueur d'onde différente du lambda max d'excitation, l'allure du spectre d'émission sera la même, mais son intensité sera plus faible. Il n'y a pas de décalage.
Par contre, tu ne peux pas mesurer d'emission dans la gamme de longueur d'onde couverte par ta lumière d'excitation.
Habituellement, pour mesurer un spectre d’émission complet, on se place à lamba(ex)<lambda_max(ex), si il y a recouvrement entre les deux spectres.

[A voir en vidéo sur Futura]