Répondre à la discussion
Affichage des résultats 1 à 7 sur 7

Protocole de marquage pour microscopie confocale



  1. #1
    lnkjv

    Protocole de marquage pour microscopie confocale

    Bonjour, je vous sollicite pour un petit souci concernant un protocole que je dois préparer. Je m’explique, mon prof m’a demandé de réalisé un protocole pour faire des lames pour aller les voir en microscopie confocale.
    Je veux marquer une cellule et voir si la molécule que je mets en présence de cette cellule est internalisée et si oui, où (dans les vésicules) ?

    J’ai à ma disposition :

    Un marqueur du noyau, un marqueur cytoplasmique, un marqueur de vésicules et un marqueur pour ma molécule.
    Moi j’ai proposé de tout marqué pour voir où se retrouve ma molécule mais apparemment ce n’est pas la démarche attendue et je ne comprends pas très bien où il voulait en venir. Il m’a parlé de colocalisation et justement si je mets tous mes marqueurs fluo je verrais où se situe ma molécule non ?

    D’avance merci pour votre aide.

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    ArrowX

    Re : Protocole de marquage pour microscopie confocale

    Non tu va cacher certaines choses. Utilise tes marqueurs dans des ordres déterminés. Pas tous en meme temps.
    La valeur d'un homme tient dans sa capacité à donner et non dans sa capacité à recevoir.

  4. #3
    Flyingbike

    Re : Protocole de marquage pour microscopie confocale

    ca serait pas mal de savoir si tu as des longueurs d'ondes différentes ou pas....

  5. #4
    lnkjv

    Re : Protocole de marquage pour microscopie confocale

    merci pour vos réponses.
    Tous mes marqueurs ont des longueurs d'ondes différentes :

    j'ai du DAPI (vectashield avec dapi)
    puis un a 590 (pour les vésicules)
    puis un a 565 (pour le cyto)
    un a 500 (ma molécule)

    je comprends pas bien le fait de les utiliser séparemment. Je vais pas pouvoir voir où ma molécule va être non ?
    je dois faire plusieurs conditions ?
    une avec que DAPI et ma molécule ?

    je comprends pas trés bien ...

  6. #5
    Flyingbike

    Re : Protocole de marquage pour microscopie confocale

    ben c'est pas super subtil, mais rien ne t'en empeche...
    Je pense qu'il attend que tu les utilise deux à deux (avec ta molécule a chaque fois)

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    ArrowX

    Re : Protocole de marquage pour microscopie confocale

    Oui c'est ça .. sachant que par exemple si tu marques TOUT le cytoplasme.. tu ne verra pas tes vésicules...
    La valeur d'un homme tient dans sa capacité à donner et non dans sa capacité à recevoir.

  9. Publicité
  10. #7
    lnkjv

    Re : Protocole de marquage pour microscopie confocale

    Merci à tout le monde pour vos réponses et si j’ai bien compris je dois réaliser plusieurs expériences
    Voila ce que je propose, pouvez vous me dire si c’est convenable et si j’ai bien compris

    Dans un premier temps je voudrais réaliser une lame avec mes cellules seules et une lame avec mes cellules seules + ma molécule liée à son fluorochrome pour montrerque la fluo est dû à ma molécule et pas à de l’autofluorescence.

    Puis 1 lame avec mes cellules + DAPI
    et une lame avec mes cellules + DAPI + ma molécule fluo

    Puis 1 lame avec mes cellules + DAPI + le marqueur du cytoplasme
    Et 1 lame avec mes cellules + DAPI + le marqueur du cytoplasme + la molécule fluo

    A ce stade je verrais si il y’a colocalisation dans le cytoplasme et si c’est le cas je refais la même expérience que la précédente en remplaçant le marqueur cytoplasmique par le marqueur des vésicules et je verrais donc si il y’a colocalisation dans les vésicules.

    Qu’en pensez vous ?

    Merci et désolé pour cette réponse tardive

Discussions similaires

  1. Logiciel Microscopie confocale 3D
    Par Acer8 dans le forum Biologie
    Réponses: 1
    Dernier message: 12/05/2014, 03h23
  2. [Biologie Cellulaire] traitement cellulaire en microscopie confocale
    Par laviva dans le forum Biologie
    Réponses: 1
    Dernier message: 12/02/2011, 22h27
  3. Microscopie confocale
    Par flyaway dans le forum Biologie
    Réponses: 5
    Dernier message: 29/03/2010, 21h42
  4. microscopie confocale et zoom numérique
    Par yop2287 dans le forum Physique
    Réponses: 0
    Dernier message: 13/01/2010, 21h22
  5. [Divers] microscopie confocale ou à épifluorescence ?
    Par calypso26 dans le forum Biologie
    Réponses: 1
    Dernier message: 29/11/2008, 10h29