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Mesure de l'activité antioxydante



  1. #1
    Oib

    Mesure de l'activité antioxydante


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    Bonsoir, j'ai besoin de votre aide

    Parmi les méthodes de l'évaluation de l'activité antioxydante, il y a la méthode appelée "pouvoir réducteur". J'ai trois questions :

    -L'acide ascorbique est utilisé comme témoin, sachant que j'ai utilisé 3 solvants pour l'extraction (eau distillée, éthanol 96%, et de l'éthanol 50%), est ce que je vais préparer l'acide ascorbique dans ces trois solvants (donc on aura 3 différents témoins) ou dans de l'eau distillée (donc un seul témoin)?

    -Lorsque je vais préparer le témoin dans les mêmes conditions que l’extrait, est ce qu'on va utiliser un blanc puisque pour les extraits on a utilisé un blanc?

    -Pourquoi est ce qu'on ajoute le chlorure ferrique?

    Voilà le protocole : ( Oyaizu 1986)

    Un millilitre de l’extrait à différentes concentrations (de 0,007à 2,5mg/ml) est mélangé avec 2,5ml d’une solution tampon phosphate 0,2 M (pH 6,6) et 2,5ml d’unesolution de ferricyanure de potassium K3Fe(CN)6 à 1%.L’ensemble est incubé au bain-marie à 50°C pendant 20 min ensuite, 2.5ml d’acide trichloroacétique à 10% sont ajoutés pour stopper la réaction et les tubes sont centrifugés à 3000 rpm pendant 10min. Un aliquote (2,5ml) de surnageant est combinée avec 2,5ml d’eau distillée et 0,5ml d’une solution aqueuse de FeCl3 à 0,1%.La lecture de l’absorbance du milieu réactionnel se fait à
    700nm contre un blanc semblablement préparé, en remplaçant l’extrait par de l’eau distillée qui permet de calibrer l’appareil (UV-VIS spectrophotomètre). Le contrôle positif est représenté par une solution d’un antioxydant standard ; l’acide ascorbique dont l’absorbance a été mesurée dans les mêmes conditions que les échantillons. Une augmentation de l’absorbance correspond à une augmentation du pouvoir réducteur des extraits testés


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