Test MTT

[Melo17]

Bonjour tout le monde,

Je dois effectuer un test de cytotoxicité sur des cellules épithéliales bronchiques Calu-3. Pour cela, j'ai acheté le MTT en poudre vendu chez Sigma (ref :2003). J'ai suivi quelques protocoles sur le net disant que l'on doit dissoudre la poudre dans du PBS à raison de 5mg/mL. J'ai donc préparé une solution à 10mL, donc j'ai dissous 50mg. Seulement voilà, impossible de dissoudre cette fichue poudre ! je l'ai agitée durant plus d'heure au vortex puis sur l'agitateur automatique mais rien n'y fait... je ne comprends pas pourtant je ne trouve nul part ailleurs ce problème. Si quelqu'un à la bonté de m'aider sur ce problème, je vous en serais bien reconnaissante !

Merci
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[Flyingbike]

Il faut la version sel comme http://www.sigmaaldrich.com/catalog/...g=fr&region=FR, parce que le votre n'a pas l'air soluble en solution aqueuse...

[Melo17]

Il faut donc que je la dissolve dans du NaCl à 15mM ?

[GamGyn]

Bonjour,
Ce n'est pas la bonne référence que vous avez commandé pour faire votre test. Ce MTT n'est ni soluble dans l'eau, ni dans du PBS ou quelconque solution aqueuse saline.
La référence de Flyingbike convient mieux pour ça.

[A voir en vidéo sur Futura]

[Melo17]

D'accord, je comprends mieux maintenant ! J'ai effectivement réessayé dans du milieu RPMI sans rouge de phénol, j'ai fait une sonication durant 20 minutes puis filtré mais...rien ! Je n'avais pas compris la réponse de Flyingbike

Merci à vous deux !

[vpharmaco]

Pour compléter: ce que tu as acheté n'est pas du MTT, mais le produit -formazan- qui est formé après réduction du MTT par les réductases mitochondriales

[Flyingbike]

ça c'est du travail d'équipe !
bonnes manips

[TanguyE]

Juste pour compléter, quand tu regarde les produits chez Sigma, dans la partie propriétés tu trouves ce genre d'indications:
- celle-ci pour ta poudre:
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assay ≥97% (TLC)
form powder
color purple
solubility acetone: soluble1 mg/mL

-et celle-là pour le sel de MTT soluble dans l'eau:
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product line BioReagent
assay ≥97.5% (HPLC)
form powder
mp 195 °C (dec.)(lit.)
solubility H2O: soluble5 mg/mL

[Melo17]

D'accord ! Je serais plus attentive la prochaine fois merci beaucoup pour votre précieuse aide !