Dégradation de l'ADN

[invite768c381f]

Bonjour,

Pour une expérience, j'ai besoin de me débarrasser entièrement de l'ADN simple et double brins présents dans ma solution.
J'utilise actuellement la DNase I cependant je ne peux utiliser du MgCl2 dans ma solution or le tampon fourni avec l'enzyme et l'enzyme elle-même est activée en présence de MgCl2.
J'ai donc essayé de remplacer le MgCl2 par d'autres activateurs potentiels tels que le MnCl2, le Cl3Co à différents temps d'incubation à 37 °C et en augmentant la quantité de Dnase I (jusqu'à 60 U de dnase / ug d'ADN) mais il reste toujours assez d'ADN dans la solution pour être amplifié par PCR.

Auriez-vous des idées pour dégrader la totalité de l'ADN sans utiliser du MgCl2 (comme activateur de la DNase I) ?

Merci beaucoup.
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[invitee4e79868]

Bonjour

La DNAse1 q besoin d'ions Mg2+ pour fonctionner correctment. Si c'est juste le sel qui vous ennuie, pourquoi ne pas utiliser l'oxyde de magnesium?
Si c'est le magnésium qui vous ennuie, vous pouvez essayer de la remplacer avec du calcium (ion bivalent également). Cependant, pas de garantie...
Le truc, c'est que la structure de l'ADN et le fonctionnement des enzymes est très lié à la présence de Mg2+, du coups, il est très difficile d'isoler l'un de l'autre...
Il est également possble d'utiliser des colonnes de purification (par exemple celles de qiagen, mais il y a d'autres fournisseurs).