dégradation de l'ADN

[invite88d94f4d]

bonjour,
je vous sollicite de bien vouloir me répondre à ces questions:
1) j'ai constaté que L'adn de la Mycoplasma se dégrade rapidement, j'ai respecté le protocole d'extraction de l'adn mes réactifs sont en bon état je soupçonne l'interférence de la mutation de la souche dans ça est il possible de considérer que les mutations et/ou la présence d'une activité exonucléasique chez la souche soient impliqués dans la dégradation de l'ADN
2) je suis entrain de préparer des bactéries compétentes au moment ou j'ai voulu mesuré la densité optique à 600nm j'ai trouvé 0,828 et donc la phase exponentielle a été légèrement dépassée dîtes moi oui ou non si je dois poursuivre les étapes suivantes de protocole parce que je n'ai pas envie de jeter toute la culture pourrais je me rattrapper ? Si vous avez un cours sur le clonage envoyez le moi please
cordialement,
mkh
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[invite853321bf]

Bonjour,

1) J'ai du mal à voir le lien entre mutation et dégradation d'ADN. Peut être tout simplement un protocole peu efficace. A savoir que les protocoles des kits donnent rarement les résultats espérés, faut souvent adapter en fonction de sa bêbête
2) Aux dernières nouvelles, la DO donne la concentration, pas la phase de croissance. A moins que tu ais fait un suivi de DO mais là comme ça, rien ne l'indique dans ton texte.

[invite88d94f4d]

salut,
merci d'avoir répondu à mes questions, mais maintenant on doit se focaliser sur la dégradation D'ADN presque tous mes collègues rencontrent le même problème pour la souche Mycoplasma meleagridis sachez qu'on travaille dans les normes, je ne sais pas franchement à quoi est dû spécialement pour cette espèce, je me suis posée la question % à la présence de Dnase mais si c'étais le cas ça ne marcherait pas pour toutes les espèces aidez moi s'il vous plaît sachant qu'on utilise la méthode d'extraction d'adn au phénol chloroforme
cordialement,
mkh

[invite853321bf]

Cette méthode est effectivement très pratique pour avoir de bonnes quantités d'acides nucléiques, mais la quantité est souvent assez variable, le nombre de lavages étant "au feeling" et dépendant de la propreté du milieu.
De plus, il faut faire attention à bien laver les ADN, le phénol et chloroforme pouvant également perturber la lecture de la concentration.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite88d94f4d]

merci pour votre collaboration