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purification ADN thymus de veau



  1. #1
    hello1

    purification ADN thymus de veau

    Bonjour,

    j'ai un TP à faire où on doit isoler de l'ADN de thymus de veau.
    1. Je voudrais savoir quels sont les avantages d'utiliser le thymus de veau comme source d'ADN? Pourquoi ne pas utiliser utiliser une autre espèce animale? J'ai cherché et j'ai réussis à trouver que ces cellules ont un rapport nucléo cytoplasmique très élevé, mais je ne suis pas certaine de comprendre ce que cela veut dire et quel avantage cela a dans cette expérience... Je sais qu'il existe d'autres avantages autres que celui-ci, en connaissez-vous d'autres?

    2. Rendu à une certaine étape dans le protocole, je dois briser les membranes plasmiques par bris mécanique ainsi qu'à l'aide d'une solution de tris-HCl, NaCl 0.075M et de EDTA qui je crois provoque la lyse des cellules en raison de sa concentration plus faible en sels que le milieu intracellulaire (en fait je ne suis pas certaine que la concentration intracellulaire soit plus grande que celle de la solution). Je dois ensuite procéder à une autre étape pour briser les membranes nucléaires. Je me demande donc comment cela se fait-il que les membranes nucléaires soient restées intactes après le mélange avec la solution et le brassage mécanique?

    Merci infiniment!!

    -----


  2. #2
    noir_ecaille

    Re : purification ADN thymus de veau

    Le thymus de veau est un "abat" -- une pièce de boucherie courante. S'agissant en plus d'un organe lymphoïde, il est riche en lymphocytes -- des cellules ayant le rapport volume du noyau (ADN) sur volume total des plus élevés. Ce qui permet de se fournir à moindre frais (+ dans un supermarché) du matériel biologique (riche en ADN) pour une première expérience d'extraction d'ADN à partir de tissu animal.

    Pour le point 2, probablement à cause de la lamina : une structure fibreuse qui joue un rôle de "paroi interne" rigidifiante, rendant le noyau un peu plus résistant à l'osmose et aux forces mécaniques. Généralement on récupère un culot de noyaux qu'on va casser par sonication.
    Dernière modification par noir_ecaille ; 17/10/2015 à 18h20.
    "Deviens ce que tu es", Friedrich W. Nietzsche

  3. #3
    hello1

    Re : purification ADN thymus de veau

    Merci beaucoup!

  4. #4
    noir_ecaille

    Re : purification ADN thymus de veau

    Je vous en prie
    "Deviens ce que tu es", Friedrich W. Nietzsche

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