Opacimétrie et dilution

[invite38cf128a]

Bonjour,

Je dois répondre à des questions à propos de la quantification des micro-organismes par opacimétrie et dilution, mais certaines me posent problèmes et j'aimerai que quelqu'un puisse vérifier mes réponses et surtout m'aider pour la question 1 que je n'arrive absolument pas à répondre.

Merci d'avance !

Voici les questions qui me posent des soucis:

On considérera que les mesures de la DO (densité optique) sont à 600 nm et sue la limite de linéarité est de 0.6.

1. Au cours de mesures de DO au spectrophotomètre, on se trouve dans 2 situations anormales:
- Après avoir dilué une suspension de levures, on mesure la DO de la dilution la plus faible: la valeur affichée par l'appareil décroît. Pourquoi? Que faut-il faire ? Quelle mesure garder? Je suis tenté de répondre pour la dernière partie qu'il faut garder la première mesure ?
- Pour suivre la croissance d'une population bactérienne dans un erlenmeyer, on place chaque prélèvement dans la classe pendant 5 à 10 minutes: pourquoi?
Ensuite on mesure leur DO: la valeur affichée par l'appareil augmente rapidement. Pourquoi? Comment peut-on éviter ce phénomène ?

2. La DO_600nmd'une suspension bactérienne dans l'eau est de 1.3.
Cette DO est elle exploitable ?Non car trop concentrée, il faudrait qu'elle soit <1.
Que doit-on faire pour connaitre sa véritable valeur (DO_corrigée)? DO_corr = DO_mesurée*facteur de dilution - A_milieu

3. Après 24h, la DO⁶⁰⁰ d'une culture est de 3.0, diluée au 1/10 elle est de 0.45, diluée au 1/100 elle est de 0.042.
Que doit penser le technicien de ces valeurs? Les valeurs sont correct car mis au même facteur de dilution, les résultats sont environ les mêmes
Etait-il nécessaire de mesurer la DO de ces 3 suspensions? Non, une seule suffit

4. Quelle est la DO corrigée d'une suspension microbienne dont la DO mesurée est de 1.5 et dont la DO de la dillution au 1/8 dans l'eau est de 0.215.
Données: l'absorbance du milieu est de 0.06.
Pour DO= 1.5 --> DO_corr = 1.44
pour DO_1/8 = 0.215 -- >DO_corr = 1.66
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[invitef08fd5ad]

Bonjour, je comprend pas très bien ton exercice, l'as tu bien recopié en entier? tu parles de 2 mesures dans le cas de la question 1, mais nous n'avons aucune information sur la deuxième mesure il est difficile de t'aiguillé dans ce cas là!

Pour la deuxième partie de la question 1 tu dois te rappeler les conditions dans lesquelles les bactéries croissent: lumière pas lumière? température? composition du milieu nutritif?

Voilà j'espère que ça ira. Bon courage

[invite38cf128a]

Bonjour,

Merci beaucoup de bien vouloir m'apporter ton aide

J'ai vérifié, il ne manque rien dans la question 1. Selon moi, les 2 mesures sont celle de la suspension de levures qui décroit, et celle de la croissance bactérienne.

Pour ce qui est de la deuxième partie de la question, je dirai que la glace permet la conservation des bactéries, de les "neutraliser" en quelques sorte. Et cette croissance augment car la température est plus grande et aussi dû à la lumière causée par le spectrophotomètre qui donne de l’énergie aux bactéries.

C'est bon?

[invitea9e5d0fd]

Bonjour,
Pour répondre à la première partie de la question 1) :
Rappel toi qu'une homogénéisation est nécessaire avant de faire ta DO. Demande toi pourquoi. (indication : tes bactéries ne sont surement pas en apesanteur :P )

2) ok, on dilue

3) Les 3 valeurs te pensent correctes ? Que ce serait-il passé si on n'avais pas fait de dilution après la première mesure ?

4) ok

Bon courage

Victor

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite38cf128a]

Bonjour,

Merci beaucoup pour l'aide!

Donc pour la 1 ça décroit dû à la non homogénéisation ? j'y avais pas penser du tout merci ^^

3. Non, il faut diluer la première car on est en saturation, mais je voulais dire par là c'est que quand on calcul DOcorr pour enlever la dilution, on retrouve approximativement la même chose

merci beaucoup.

[invitea9e5d0fd]

Bonjour,

C'est pas que tu n'as pas homogénéisé avant (sinon tu aurais une valeur qui ne bougerait pas) mais c'est que les bactéries sédimentent très vite. Elles tombent au fond de la cuve donc ta DO change

et tu ré-homogénéises si tu veux reprendre une mesure


Bonne journée

Victor