Gène Syncytine

[John97]

Salut tous,

Quelqu'un saurait si le gène syncytine a un interêt à être cloné ?
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[Flyingbike]

si on y a un intérêt, alors oui...

votre question est.... étrange..

[John97]

Non mais je ne sais pas pour palier quel problème on le clone justement, est-ce que il peut y avoir des femmes développant des pathologies placentaires et le clonage (récupération de la protéine) apporterait quelque chose ?

[Flyingbike]

ben c'est (était...) indispensable dès qu'on voulait produire la protéine, la modifier, étudier ses interactions, étudier des mutations, faire des animaux transgéniques.... etc....


je dis était car maintenant on peut synthétiser les gènes, du moment qu'on a leur séquence, plus obligés de les sortir du génome....

[A voir en vidéo sur Futura]

[John97]

Mais dans un but médical par exemple ?

[Flyingbike]

pas forcément directement mais par exemple :


produire l'insuline = clonage du gene et production en bactéries ou levures = médicament

étudier la physiopathologie d'une maladie = on a une famille malade, on a un variant sur un locus, on trouve une mutation dans une région codante : on clone le gene, on fait des mutagenèses, on étudie les conséquences in vivo ou in vitro

trouver une molécule thérapeutique = on sait que l'activation d'un récepteur R provoque des cancers, on clone le récepteur, on établit des lignées cellulaires le surexprimant, sur lesquelles on testes des milliers de composés pour trouver un inhibiteur



ce sont des exemples plus ou moins fictifs mais j'espère que ça donne une idée

[John97]

D'accord ! Le "étudier la physiopathologie d'une maladie = on a une famille malade, on a un variant sur un locus, on trouve une mutation dans une région codante : on clone le gene, on fait des mutagenèses, on étudie les conséquences in vivo ou in vitro" marcherait avec ce que je recherche, une sous-expression du gène syncytine entrainerait une pré-éclampsie chez les femmes enceintes. Donc étudier ce gène après clonage, faire des mutagenèses (c'est à dure ?) et les conséquences in vivo ou in vitro ( la aussi je ne comprends) je pense que ça collerait avec ce que je recherche

[Flyingbike]

Oui mais attention la sous expression d'un gène peut très bien n'avoir aucun rapport avec ce gène mais avec un autre impliqué dans son expression, ou avec le promoteur.

Pour la mutagenèse : imaginons qu'on a des individus avec une mutation sur un gène et qu'on veut vérifier si cette mutation est la cause de la maladie et le mécanisme : on reproduit la mutation dans un plasmide par exemple, artificiellement

Pour l'histoire des conséquences : vous voulez voir ce que fait votre proteine, sauvage ou mutée : il faudra la faire s'exprimer dans un modèle et en mesurer les effets, pour cela il y a le choix : lignée cellulaire, modèles animaux, etc...

[John97]

Je peux cloner ce gène, l'introduire dans un vecteur ( enzymes de restriction, lygase...) + mutagenèse, j'en fait un autre témoin sans mutation, je regarde les protéines produites ?

Ahh mais du coup oui, la sous expression j'ai un problème

[John97]

Je sais :

"Selon une étude récente, la syncytine pourrait être un des agents causals possibles chez certaines maladies neuro-dégénératives. Il a été observé que chez les patients atteints de sclérose en plaque, le taux d’expression de syncytine au niveau du système nerveux central est significativement plus élevé que chez les individus sains."

Donc, je reprends, on peut étudier la physiopathologie de CETTE maladie, on prends des individus malades, dont variant sur un locus, on trouve une mutation dans une région codante une maladie, deux plasmides (un avec un site mutée par mutagenèse, un non mutée (on parle de sites mutés). On introduit dans une bactérie pas transformation. Production de la protéine. Par contre la faudra utilisé un modèle animal pour voir les conséquences , parce que sur une bactérie ça va pas être top. Donc la on va utiliser la transfère ! Donc clonage + mutagène = protéine mutée -> transègne ou directement, injecter l'ADN muté ?

[Flyingbike]

si on parle d'une maladie humaine, aucun intéret de la produire dans des bactéries... (enfin si mais c'est pas le principal)

on peut faire exprimer les différentes formes dans des cellules par exemple, dans ce cas on fait rentrer le plasmide (de nombreuses techniques, transitoires, stables, inductibles, etc....)

en fonction des résultats, on peut choisir de passer chez l'animal, soit en faisant des modele transgéniques, soit en utilisant des vecteurs viraux, l'electroporation, etc....

pour la sous expression : il s'agit par exemple d'utiliser un sh ou siRNA dans des cellules pour empecher l'expression de la protéine, voire de faire des modèles animaux KO.

[John97]

Est-ce que un gène muté peut entrainer sa surexpression ?

Je me suis dit :

On prend le gène de la syncytine
On le clone et on effectue des mutagenèses comme tu as dit, selon la mutation qu'on a faite, on regarde après qu'on est introduit le vecteur YAC porteur de la mutation par un liposome dans le modèle animal, ce que ça engendre
Et selon les conséquences, identifié quel mutation est responsable de la pathologie.
Enfin, l'identification du gène défectueux pourra être remplacer en génothérapie, par des rétrovirus, ou encore des ARN interférants.

[John97]

Et en plus, il y a un truc qui m'embête dans ce que tu as dit c'est:

Tu prends la séquence contante du gène mutée chez l'individu malade.

Bah tu la connais déjà donc pas besoin de clonage et de mutagenèse ??

[Flyingbike]

ben on peut utiliser la mutagenèse pour reproduire une mutation connue, mais on peut aussi choisir de faire des mutations a des endroits stratégiques pour voir ce que ça fait


c'est un domaine très vaste, tout est possible, et surtout il y a eu beaucoup d'évolutions techniques !

[John97]

D'accord,
Mais je vois plus l'intérêt de cloner un gène non mutée qu'on sait que s'il est mutée peut alors entrainait une surexpression et donc après en aval trop de protéines pouvant être pathogène, donc on pourra identifier selon les mutations qu'on fait les effets tu vois et identifier que c'est CETTE mutation à l'origine de la surpression. Par contre cloner le gène mutée quel est l'interet ?