Bonjour,

J'ai un exercice dont j'ai le corrigé, mais après l'avoir refait j'ai l'impression de m'être trompé quelque part lorsque j'ai écris mon corrigé.
Pour faire court, l'exercice consiste à calculer la constante de dissociation du complexe ES, sachant que:
- L'association de S à E est mesurée par dialyse à l'équilibre.
- S n'est pas transformé, mais l'interaction ES n'est pas affectée.
- L'enzyme E a 2 sites de fixation.
- Au départ, on retrouve dans le compartiment A 10μM d'enzyme E et dans le compartiment B 50μM de substrat S.
- A l'équilibre, dans le compartiment B, la concentration de S est de 20 μM.



Voici le raisonnement que j'ai eu lorsque j'ai refais l'exercice:

Équilibre considéré: [E] + 2[S] <=> [E2S]
La constante de dissolution Kd du complexe E2S est donc Kd = ( [E]libre*[S]²libre ) / ( [E2S] ).

Il me faut donc trouver ces trois concentrations à l'équilibre.

• Dans le compartiment B, la concentration de S libre est de 20μM. Donc elle le sera de même pour le compartiment A.
[S]libre = 20μM

• Pour trouver la concentration en complexe ES, j'aurais appliqué, en se placant dans le compartiment A, cette égalité:
[S]total = [S]libre + [ES]

Puisqu'on n'a plus que 20μM dans le compartiment B, les 30μM de S restants sont donc dans le compartiment A.
Puisqu'il y a 20μM de S libre dans le compartiment A, j'aurais donc conclu que les 10μM restant sont complexés avec une enzyme E.
Mais puisque une enzyme possède deux sites de fixation, alors j'en ai conclu que la concentration [ES] n'est pas de 10μM, mais de 5μM, puisque ce qu'on utilise pour trouver cela, c'est la concentration en S.

Et du coup, il y aurait 5μM d'[E]libre, puisque nous avions 10μM d'E initialement.

• Au final, j'aurais trouvé un Kd = 20² = 400.


Dans mon corrigé que j'ai, je ne semble pas avoir pris en compte que l'enzyme fixait 2 molécules de Substrat, et j'avais donc comme concentration [ES] = 10 μM, et comme concentration en [E]libre à l'équilibre = 0, ce qui ne va pas, si ?


Je suis désolé pour ce poste à rallonge, j'espère que ça ne découragera personne !
Merci d'avances et joyeuses fêtes !