Bonjour, j'ai eu un TP de biologie cellulaire sur le rôle de la colchicine sur la sécrétion d'insuline. On a donc étudié le rôle de la colchicine sur le gène TRPV4. On remarque que la colchicine agit sur la gène et non pas sur l'ARN correspondant mais je ne comprends pas comment, quelle est la nature de cette action ? Et quel est le rapport entre TRPV4 et la sécrétion d'insuline ? J'ai cherché sur internet mais je n'ai pas trouvé.
Merci.
vous n'avez pas fait un mix ? parce que je ne vois pas de lien entre la colchicine (qui désorganise les microtubules) et TRPV4, ni entre TRPV4 et la sécrétion d'insuline...
Et je doute que la colchicine ait des effets géniques (directs)...
Justement je ne vois pas le rapport et je ne trouve aucun lien ni entre TRPV4 et la sécrétion d'insuline, ni entre la colchicine et le gène TRPV4.
Dans mon poly de TP, c'est écrit que TRPV4 code pour une protéine impliquée dans la sécrétion d'insuline (un récepteur ? Ce n'est pas précisé).
On a traité des cellules bêta pancréatiques à la colchicine et extrait leur ARN. Grâce à cet ARN, on a obtenu l'ADNc et on a fait une électrophorèse suite à une PCR ayant isolé et amplifié le gène TRPV4.
Résultat : l'ARN est intact mais l'ADNc non (on a fait un contrôle pour comparer).
Et on nous demande de donner le mode de sécrétion de l'insuline.
La colchicine agissant sur les microtubules (en tout cas c'est tout ce que je sais pour le moment), je ne comprends pas.
Il y a bien un lien entre les canaux calciques et l'insulinosécrétion mais il s'agit de canaux voltage dépendants, et d'après ce que j'ai lu ce n'est pas le cas de TRPV4.
Vous avez du rater un truc. Dans ce que vous décrivez, toute différence entre l'ARN et l'ADNc est expérimentale, parce que si vous avez fait une transcription inverse, ARN=ADNc (quantitativement et qualitativement).
Tout cela est vraiment très très obscur.... Vous pouvez peut être mettre l'énoncé ?
J'ai lu que TRPV4 est un canal calcique. C'est l'entrée de Ca2+ dans la cellule qui permet la libération de l'insuline. C'est peut-être le lien entre la sécrétion d'insuline et TRPV4, non ? Mais je ne vois toujours pas le rapport entre le gène TRPV4et la colchicine.
Je vais résumer mon poly car avec les protocoles, c'est très long.
On a fait une extraction d'ARN de cellules pancréatiques traitées et de cellules non traitées à la colchicine. On a mis cet ARN au congélateur pour la séance suivante.
à la séance suivante, l'enseignant nous a donné de l'ADNc et nous a dit qu'on devrait préciser dans le compte rendu que cet ADNc était issu du traitement de nos ARN à la reverse transcriptase.
Ensuite on a effectué une électrophorèse (après PCR). L'enseignant nous a fait le schéma suivant :
ARN non traité -> bande en 28s et en 18s
ARN traité -> bande en 28s et en 18 s
=> L'ARN n'a pas été dégradé
ADNc non traité -> bande pour TRPV4
ADNc traité -> pas de bande pour TRPV4
=> confirmation du rôle de la colchicine.
(j'ai noté mot pour mot ce qui était écrit)
DSC_0419.jpg
Voilà la présentation du TP, je ne pense pas m'être trompée dans mon message mais si oui, c'est peut-être pour ça que je ne comprends pas.
ouais, je vois, c'est juste un TP pour vous faire faire de la pratique, ça n'a pas grand sens scientifiquement....
Anyway, ce qu'on montre c'est que l'ARN n'est pas dégradé par le traitement (encore que se baser sur un ratio visuel 28/18S est un peu rapide...) et qu'en présence de colchicine il y a diminution de l'expression du gene (donc de l'ARN donc du cDNA) de ce canal... Je vois pas ce qu'on peut dire de plus, on ne peut meme pas dire que l'effet génique de al colchicine est spécifique (puisqu'on n'a aucun niveau d'expression d'un gene contrôle, et que l'electrophorese d'ARN ne sert qu'a faire joli...)...
Oui mais ça nous embrouille plus qu'autre chose et nous force à faire des conclusions qui sont scientifiquement fausses.
Donc, si on ne tient pas compte du TP, dans les faits, la colchicine n'a aucune influence sur l'expression du gène TRPV4 ? Et le gène TRPV4 n'est pas impliqué dans la sécrétion d'insuline, c'est ça ?
pour l'effet de la colchicine, on ne peut pas conclure (il y a un effet, mais c'est peut être un effet transcriptionnel global, enfin ça peut être n'importe quoi qui n'a rien a voir spécialement avec TRPV4). Pour la sécrétion d'insuline, je n'en sais rien, il ne me semblait pas qu'il était impliqué mais en cherchant je n'ai absolument rien trouvé sur TRPV4 et insuline sur pubmed... :\
D'accord, merci !
