Expliquer le Blocking buffer
Bonjour à tous,
Voilà, j'ai un peu honte de demander cela car c'est pour mon mémoire de stage mais on m'a demander d'expliquer à quoi sert le "blocking buffer" dans l'immunohistochimie. Je sais qu'il sert à augmenter la spécificité du signal en bloquant les signaux parasites... Comment ? Sur quel partie du premier anticorps va t'il se mettre ?
Merci d'avance pour vos réponses!
Sophie
c'est plutôt sur les protéines endogènes que le bloquant se place. Simplement en se mettant un peu partout, là ou il y a interaction, mais de façon non spécifique...
Bonjour,
en immunohisto, je ne sais pas. Par contre, en western blot, on utilise un blocking buffer pour saturer la membrane. Ce buffer est souvent du lait ou de la BSA ou une sauce commerciale... Le principe est qu'il contient des protéines. Les anticorps étant eux même des protéines, ils pourraient se fixer non spécifiquement sur la membrane et faire du bruit de fond lors de la révélation. En saturant la membrane avec des protéines non spécifiques, il y a moins d'AC qui va s'y fixer car les interactions protéine/membrane non spécifiques doivent être plus "fréquentes" que les interactions protéine/protéine non spécifiques.
Le principe devrait être similaire en immunohisto...
L'oeuf ou la poule en premier? L'oeuf provenant d'une proto-poule bien sûr...
Merci beaucoup a tous les deux, je n'ai malheureusement pas pu vous repondre avant mais merci beaucoup
