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colonies rouges sur TTC et recherche E.coli



  1. #1
    Annaick_R

    Question colonies rouges sur TTC et recherche E.coli


    ------

    Bonjour,

    j'essaye de dénombrer les coliformes totaux et thermotolérants dans l'eau issue de la micro-filtration de lisier. J'ai un petit souci d'interprétation de mes cultures sur milieu lactosé au BBT + TTC + tergitol 7.

    Je n'obtient que des colonies roses foncée (réduction du TTC). Le milieu ne vire pas au jaune mais reste bleu : le lactose du milieu n'est pas dégradé. Le test oxydase est positif. Le tergitol 7 étant un inhibiteur des bactéries Gram+, celles-ci doivent être Gram-.

    J'aurais donc des colonies Lac-, TTC+, oxydase+ alors que je recherche les critères Lac+, TTC-, oxydase - pour dénombrer E. coli.

    Quand je cultive sur BBLVB ou sur bouillon au lauryl sulfate, j'ai toujours un trouble (plutôt dans le haut du tube -> aérobie ?) mais jamais de dégagement gazeux... Ces bactéries seraient bien Lac-.

    Je n'aurais pas de coliformes dans mon eau (donc la filtration serait efficace) ? Quelles sont alors ces bactéries qui colonisent mon milieu ?


    D'avance merci beaucoup !

    -----

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  3. #2
    Izmos

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    la microfiltration semble etre efficasse..mais le developpement de bacterie sont peu etre issu de spore qui peuvent peu etre franchire le filtre.
    je vais reflechir un peu plus

  4. #3
    Izmos

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    gram - qui peu sporulé
    oxy +
    aerobie qui semble strict...
    je pense a un pseudomonas, on le retrouve tout le temps partout celui là
    il faudrai vérifier, je suis pas certain

  5. #4
    Izmos

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    arf! je flood

    mais en fait il y'a un probleme, car le pseudomonas ne devrai pas pousser dans ton bouillions au lauryl de sulfate:"Les bactéries aérobies sporulées sont totalement inhibées"

    mais pour le moment je ne vois que lui...

  6. A voir en vidéo sur Futura
  7. #5
    Izmos

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    Thermotolerants
    donc:
    aéruginosa
    ou
    pseudomallei

    mais il y'en a telement...

  8. #6
    Annaick_R

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    Oui, ça doit être sûrement des Pseudomonas :
    j'ai regardé la notice de mon test oxydase, les bactéries oxydase+ sont principalement soit Pseudomonas soit Neisseria. Vu que Neisseria est difficile à cultiver et qu'il faut la garder au chaud, ça m'étonnerai que ça soit des Neisseria. Il reste donc Pseudomonas.

    Au fait, ça n'a pas poussé sur BBLVB.

    J'ai vu que Pseudomonas pouvait donner des maladies graves. Je n'ai peut-être pas d'E.coli dans mon eau mais des Pseudomonas, surtout P. aéruginosa...c'est pire, non ? J'en ai un tapis après filtration de 100 mL sur membrane 0,45µm (les spores doivent passer au travers).

    De toute façon, pour en avoir le coeur net, il faudrait que j'achète les milieux spécial-Pseudo.

    Annaïck.

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  10. #7
    Izmos

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    si c'est un pseudomonas aeruginosa cultive sur de nombreux milieux utilisés pour l'étude des entérobactéries (mais là c'est pas toujour le cas..).

    Les cultures dégagent une odeur très caractéristique de seringa (oui..encore une fois..pas oujour lol) et elles présentent une coloration verdâtre (quand elle le veu bien).

    c'est certain que c'est mieu pour toi de ne pas avoir ce germe dans ton eau en fin de mannipulation... mais là cela depend de ce que tu veu en faire de ton eau...

  11. #8
    Meningo

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    D'après les données que tu as obtenues : Lac-, ox +, les bactéries que tu obtiens sont des bacilles gram nég non fermentaires (aérobie strict).

    J'ai du mal à saisir comment du fonctionnes : tu mélanges du lisier avec de l'eau et tu filtres ? Si c'est le cas, les bactéries proviennent de l'eau (très classique). Ce sont alors essentiellement des bactéries appartenent aux genres Pseudomonas et Acinetobacter (pas de Neisseria dans l'eau, et ce sont des coccis : as-tu fais un Gram sur le haut du bouiilon qui est trouble, et sur tes colonies ?)

    Ensuite, tu ne peux pas affirmer l'espèce comme ça : il faut des tests spécialisés (à partir de galeries etc...)
    Le seul moyen de t'orienter facilement (sans affirmer) vers un P. aeruginosa c'est la production de pigments (jaune, vert ou rouge) après les avoir fait pousser sur une gélose incolore (ca pousse très facilement).....mais il y en a qui n'en ont pas.

    J'ai vu que Pseudomonas pouvait donner des maladies graves
    Oui, mais pas chez n'importe qui. (infections nosocomiales : à l'hopital)

    Je n'ai peut-être pas d'E.coli dans mon eau mais des Pseudomonas, surtout P. aéruginosa...c'est pire, non ?
    Non, il y en a même dans les eaux embouteillées. C'est un germe de l'eau, contrairement à E. coli qui signe une contamination fécale.

    De toute façon, pour en avoir le coeur net, il faudrait que j'achète les milieux spécial-Pseudo.
    Peut-être pas.

    Nb : les bacilles ox+ ne sporulent pas (grosso-modo, ce sont que les bacilles Gram+ qui sporulent)

  12. #9
    Meningo

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    Oups, petite boulette (Trop tard pour éditer)
    Retirer Acinetobacter (ox-) de mon baratin et remplacer plutôt par apparentés.
    Que je ne me fasse pas tirer les cheveux par des pros en bactério

  13. #10
    Annaick_R

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    Citation Envoyé par Meningo
    J'ai du mal à saisir comment du fonctionnes : tu mélanges du lisier avec de l'eau et tu filtres ? Si c'est le cas, les bactéries proviennent de l'eau (très classique).
    En fait, je filtre directement le lisier (5% MS maxi = 95% d'eau) d'abord par microfiltration puis par nanofiltration et je surveille la qualité de l'eau en sortie. Donc en principe, il n'y a pas d'apport d'eau, sauf un tout petit peu pendant la pré-filtration juste avant la microfiltration.

    Citation Envoyé par Meningo
    as-tu fais un Gram sur le haut du bouillon qui est trouble, et sur tes colonies ?)
    Non, je n'ai pas de quoi le faire au labo et en plus je n'en ai jamais fait, ni même observé. Je crois que ce n'est pas très compliqué mais parfois l'interprétation n'est pas facile.

    Citation Envoyé par Meningo
    Le seul moyen de t'orienter facilement (sans affirmer) vers un P. aeruginosa c'est la production de pigments (jaune, vert ou rouge) après les avoir fait pousser sur une gélose incolore (ca pousse très facilement).....mais il y en a qui n'en ont pas.
    Sur CASO agar en tube, j'ai obtenu un tapis blanc.

    Citation Envoyé par Meningo
    Non, il y en a même dans les eaux embouteillées. C'est un germe de l'eau, contrairement à E. coli qui signe une contamination fécale.
    J'avais lu dans un bouquin de surveillance microbiologique des eaux que les normes sont : absence de P. aeruginosa dans 250mL (moi j'ai déjà un tapis avec 100mL!) pour les eaux en bouteilles, les eaux de sources (à l'émergence), les eaux minérales (à l'émergence) et les eaux thermales.
    Moi, c'est pour rejeter dans la nature. C'est peut-être moins génant si c'est une bactérie normale de l'eau ?

    Merci en tout cas de votre aide !

    Annaïck.

  14. #11
    Meningo

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    En effet, je crois que j'ai mélangé plusieurs choses concernant les potabilités et les eaux embouteillées.
    Apparement les eaux embouteillées ne doivent pas contenir de P. aeruginosa, alors que pour une potabilité classique (eau du robinet ) la recherche est optionnelle.

    Moi, c'est pour rejeter dans la nature. C'est peut-être moins génant si c'est une bactérie normale de l'eau ?
    Aucun soucis, à mon avis.

  15. #12
    Izmos

    Re : colonies rouges sur TTC et recherche E.coli

    Mais la du coup.. c'est étrange.

    je m'explique,bacille long et fin va passé la barriere de la microfiltration puis de la nanofiltration alors q'une petite E.colis est arrété net ???

    Je pense aussi que les rejets de cette bacterie de l'environnement ne te pausera pas de probleme... mais le mieu et quand meme te se renseigner sur une éventuelle législation.

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