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Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique




  1. #1
    zazou123

    Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

    Bonjour à tous !
    je dispose de 3 tampons de lyse mais je n'arrive pas à dire s'ils sont hypotoniques/isotoniques ou bien hypertoniques. pouvez vous m'éclairer svp. je sais qu'il y a une histoire de concentration en sels, et de mouvement d'eau mais je n'arrive pas à savoir qu'elle est la concentration intracellulaire.

    tampon A : HEPES 10mM ; KCl 10mM ; MgCl2 1mM ; EDTA 0,5mM ; EGTA 0,1mM
    tampon B : HEPES 20mM ; NaCl 400mM ; MgCl2 1mM ; EDTA 0,5mM ; EGTA 0,1mM
    tampon C : Tris 10mM, pH 7,5 ; NaCl 150mM ; Triton X100 1% ; deoxycholate de sodium 1% ; SDS 0,1% ; NaF 5mM

    merci !

    -----


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  3. #2
    Flyingbike

    Re : Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

    Bonjour

    Une solution isotonique (ex le sérum physiologique) est a 150 mM NaCl

    Avec cela vous pouvez répondre à la question
    La vie trouve toujours un chemin

  4. #3
    zazou123

    Re : Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

    merci,

    donc si j'ai bien compris :
    tampon A = hypotonique et fait éclater la cellule (entrée d'eau et gonflement)
    Tampon B = hypertonique donc sortie d'eau -> mais ce tampon me sert à lyser l'enveloppe nucléaire donc est ce vraiment hypertonique ? je n'arrive pas à visualiser comment ça casse la membrane nucléaire ? le noyau devient tout "petit" et finit par éclater aussi ?
    tampon C = isotonique


  5. #4
    Flyingbike

    Re : Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

    C'est ça

    C'est le protocole de Schibler ?
    Il me semble que le but est de faire sortir les protéines en même temps que l'eau, à partir du tampon B
    La vie trouve toujours un chemin

  6. #5
    zazou123

    Re : Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

    je ne sais pas si c'est le protocole de Schibler...
    je fais une fragmentation cellulaire (centri différentielle) pour séparer les protéines cytosoliques et protéines nucléaires pour analyser la translocation de ma protéine d'interet.

    Merci pour vos réponses !

  7. A voir en vidéo sur Futura

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