Bonjour à tous,
Je suis en BTS et en stage j'effectue des Western Blot. Dans cette technique j'utilise du SDS (Sodium dodécyl sulfate) dans le tampon de migration et dans les gels de concentration et de migration.
Je me demande si le SDS à un rôle différent selon sa concentration, ou son utilisation (en tampon ou en gel). Est -il possible qu'en plus de charger négativement les protéines, il les dénature plus ou moins suivant ces critères ?
Je vous remercie d'avance !
Ang.
Bonjour,
Oui tout à fait. Le SDS est un dénaturant protéique selon la concentration. Il joue un double rôle dans la migration en SDS-page : dénaturer et charger les protéines.
En cas de westernblot on utilise souvent une concentration plus faible en SDS afin de l'éliminer rapidement au lavage et redonner une configuration native (ou presque) aux protéines.
Bonjour,
Donc d'après vous, lors de ma révélation sur membrane avec des anticorps, mes anticorps reconnaissent mes protéines dans leur configuration d'origine (structure III)? Je pensais qu'elles restaient sous conformation I.
Et pour ce qui est d'utiliser du SDS à la fois dans les gels et dans le tampon de migration, pensez vous que cela interviens dans la concentration finale du SDS et donc de son rôle? pourquoi ne pas en mettre que dans le tampon?
Merci
Ang.
sur un WB classique, les protéines sont dénaturées thermiquement en présence de ß-mercaptoéthanol
Il faut du SDS dans le gel pour maintenir la charge des protéines
La vie trouve toujours un chemin
Oui je sais, on peut aussi utiliser du DTT qui est non hépatotoxique et inodore pour les dénaturer. Mais je me demande pourquoi on utilise du SDS dans le tampon ET dans les gels. Ne pourions nous pas mettre du SDS en plus forte concentration dans le tampon et attribuer la charge du gel de concentration et du gel de migration simplement avec des solutions de Lower buffer et Upper buffer sans SDS (Trizma base + Acide chlorhydrique pour ajuster le pH souhaité) ?
Merci à vos pour vos réponses !
Ang.
