Dénombrement E.coli

[invitea1ae1b3d]

Salut à tous !

Bonjour voici mon problème, je recherche un nombre théorique pour dénombrer les bactéries E.coli plus précisément : E.coli U12 HB 101 1414

Je sais que le moyen qui donne le pourcentage d'incertitude le plus bas et le fait de faire plusieurs dilution de facteur 10, ou sinon y'a d'autre moyen comme la spectrométrie.. mais moi dans mon cas je n'ai pas besoin d'avoir une petite marge d'incertitude. Donc n'y aurait-il pas un nombre théorique qui dénombre le nombre de bactérie e.coli sur une surface connu ? ou plutôt qui dénombre le nombre de bactérie pour une colonie de 1mm de diamètre ou quelque chose du genre ?

Merci de votre compréhension !
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[invite2e21fee6]

Bonjour,

Cela doit être en milieu solide obligatoirement? En milieu liquide il existe le dénombrement sur cellule et la lecture de densité optique à 600nm... en milieu solide je n'ai aucune idée...

[invitea1ae1b3d]

En milieu solide et liquide si possible.

Mais c'est quoi exactement le dénombrement sur cellule, car après recherche j'ai du mal à comprendre.

Merci

[invite9dc7b526]

tu peux compter les cellules au microscope (ce que dit Aqualung) ou bien tu peux faire une qPCR sur un marqueur propre à la souche qui t'intéresse.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitea1ae1b3d]

Ah ok merci pour vos réponses !

[invite2e21fee6]

Il s'agit de cellules qui resemblent à des lames de microscope. Sur chaque cellule est gravée une grille de carrés dont on connait la surface. Sur base d'une estimation de la hauteur de liquide présent entre la grille de comptage et une lame de verre couvre-objet, on peut arriver à estimer le volume de liquide présent sur la grille.
A l'aide d'un microscope il suffit de compter le nombre de bactéries présentes sur la surface considérée. Tu as par exemple 100 bactéries sur 4 carrés, ce qui fait 100 cellules sur 10 µl (j'invente ce nombre, la correspondance est notée sur la cellule) et tu peux alors passer au nombre de cellules par ml (qui est souvent la référence).

C'est approximatif mais assez utile comme méthode. Sinon la DO à 600 nm est très rapide.

[Flyingbike]

Hello
Petites précision sur les idées évoquées ici (bonnes mais meilleures quand on connait leur limites)

La méthode au microscope est peu fiable si on veut un dénombrement de cellules vivantes (ce qui est généralement le cas) et ne permet pas de différencier des colonies ni de sélectionner le dénombrement, si besoin. en plus, il faut compter vite parce que ça bouge !!!

La méthode au spectromètre est encore moins fiable, on peut avoir une DO de 5 mais aucune cellule vivante. Pire, selon les souches (je ne sais pas pour E. coli) il n'y a aucune corrélation entre le dénombrement et l'absorbance notamment en culture saturée.

Pour la PCR, on peut avoir un nombre relativement fiable de bactéries mais il faut étalonner si on veut un dénombrement absolu. Meme problème en ce qui concerne la viabilité

Donc en premier lieu il faut savoir si on veut un dénombrement réel en UFC (= cellules viables) ou juste un nombre approximatif de bactéries vivantes ou mortes dans un volume donné.
En clair, on veut compter quoi, et dans quoi ?!

Bonsoir a tous