Bruit de fond lors d'un southern

[invite153e7487]

Bonjour,

Un ami à moi me dit qu'il a beaucoup de bruit de fond sur la membrane lorsqu'il effectue un Southern Blot... je ne sais pas bien quoi lui répondre, je ne connais pas le protocole qu'il utilise... mais à votre avis, ca vient d'où ?

je pense à une mauvaise préhybridation, ce qui fait que ses sondes s'hybrident un peu partout ou bien mauvaise température d'hybridation qu'en pensez vous?

merci
T.
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[invitec9f0f895]

Moi j'aurai tendance a dire que soit c'est la préhybridation qui n'a pas ete efficace (donc beaucoup de bruit de fond! si le blocage des sites aspecifiques n'est pas efficace), ou alors la sonde utilisée est trop concentrée ce qui entraine des hybridations aspecifiques. Sinon la derniere possibilité est que les lavages n'ont pas été effectués a une temperature suffisament elevée ou a des concentrations salines suffisament fortes.

YOyo

[invite153e7487]

merci pour cette réponse
je transmettrai