Immunologie

[invitee9ee2b2a]

Bonsoir à tous,

Je suis actuellement en dernière année de mon bachelier en agronomie et je rédige mon travail de fin d'étude.
Je suis confrontée à quelques petits soucis lors de la rédaction de celui-ci, j'ai choisi un sujet n'ayant rien à voir avec la formation que j'ai reçue.

Lors de mes expériences, j'ai fais de l'immunologie. J'ai bien entendu cherché avant de venir vous appeler à l'aide.

J'ai fais de la coloration immunohistochimique indirecte et je n'arrive pas à comprendre le principe de la révélation au DAB. Je sais que le colorant brun se produit après la réaction du DAB avec la peroxydase qui se situe sur l'anticorps secondaire mais ce n'est vraiment pas clair pour moi.

Merci pour votre aide,

Vinciane.
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[Flyingbike]

Qu’est ce qui n’est pas clair ?

On a un anticorps primaire qui reconnaît la cible d’intérêt
Un anticorps secondaire qui reconnaît le précédent
Et enfin un substrat coloré qui se produit en présence du précédent ce qui permet au final de visualiser la cible d’intérêt

[invitee9ee2b2a]

En gros tu dis exactement ce que j'ai écris ^^'
C'est trop vague comme explication....

Mais je pense avoir trouvé la réponse à ma question!
En fait l'anti corps secondaire est couplé à de la péroxydase, et quand on met une goutte de DAB dissous dans de l'eau oxygénée sur la coupe, la péroxydase couplée avec l'anticorps secondaire réagit avec l'eau oxygénée, ce qui fait précipiter la DAB, c'est ça?

[Flyingbike]

Ben je suis pas entré dans les détails avant de savoir ce qui n’était pas clair
Effectivement le secondaire est couplé à la peroxydase de façon covalente et la réaction à lieu comme vous le dites

En fait dans la réalité la plupart du temps l’anticorps secondaire est couplé à la biotine et on ajoute par dessus la peroxydase couplée à la streptavidine (la biotine et la streptavidine ont une très forte affinité). Cela permet d’amplifier le signal (plusieurs enzymes par anticorps) et avoir le choix de la technologie de révélation (En changeant la streptavidine mais en utilisant le même secondaire). Pour votre culture personnelle !

[A voir en vidéo sur Futura]