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Séquençage par méthode de Sanger à partir d'une PCR



  1. #1
    Guigzz

    Question Séquençage par méthode de Sanger à partir d'une PCR


    ------

    Bonjour !


    Alors, j'ai déjà regardé à travers les autres discussions à propos de la méthode de Sanger mais la réponse à mon problème (très spécifique) ne s'y trouve malheureusement pas !

    J'ai un cours sur le séquençage de l'ADN, et on nous y décrit notamment la méthode de Sanger. Seulement un élément du cours, non expliqué, me fait bloquer...
    Il est dit que l'on peut séquencer de l'ADN génomique, de l'ADNc, ou encore des produits de PCR (ex: séquences de produits de PCR obtenus à partir des exons d'un gène) ! Et c'est là que ça bloque, je ne comprends pas comment on peut faire une PCR des exons d'un gène, qui soit ensuite exploitable par Sanger...

    Si on reprend les bases même de la biologie moléculaire, on a après transcription, maturation, épissage... : ADN --> ARN (transcrit primaire) --> ARNm !!
    Donc d'après moi on ne peut que garder les exons d'un gène grâce à un ARNm (donc la complémentarité de ces exons in fine) après épissage du transcrit primaire ! Or dans mon cours on nous dit que PCR => à partir de l'ADN !
    Est-ce c'est en fait parce qu'ils passent par l'ARNm, pour revenir ensuite à l'ADN exempt de ses introns, grâce à une rétro-transcriptase/transcriptase reverse (comme si c'était de l'ARN viral) ? C'est la seule possibilité que je vois, avec mes connaissances...

    Si quelqu'un pouvait me confirmer que c'est bien ça ou me corriger sur mon erreur de raisonnement, ça serait fort gentil à lui !!


    Un grand merci !!!

    -----

  2. #2
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : Séquençage par méthode de Sanger à partir d'une PCR

    Vous avez tout compris
    Un ADNc comme on dit, s’obtient à partir d’un ARNm qui est retrotranscrit. On a donc un ADN qui correspond à une séquence codante dépourvue d’introns!

    La retrotranscription est une technique classique de biologie moléculaire. Elle sert par exemple à quantifier l’expression d’un gêne par qPCR, en utilisant les messagers qui sont retrotranscrits pour servir de matrice à la PCR
    Bonne soirée
    La vie trouve toujours un chemin

  3. #3
    Guigzz

    Re : Séquençage par méthode de Sanger à partir d'une PCR

    Bonjour,
    Un grand merci pour votre réponse et vos précisions sur le sujet !!

    Bonne journée

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