Bonjour à tous. J'ai un compte rendu de TP à faire, mais je ne comprend pas bien une des expériences. Dans le protocole il est expliqué que différents pourcentages de sérum humain sont ajoutés aux cultures cellulaires. Or du sérum de veau fœtal à déjà été ajouté pour permettre la croissance cellulaire, quel est donc l'intérêt des différents pourcentages de sérum humain ? Est ce qu’il est ajouté pour apporter des immunoglobulines humaines et ainsi vérifier que l’effet du Rituximab n'est pas du à sa partie Fc humaine ? Ou je fais totalement fausse route ? J'aimerais trouvé par moi-même, mais si quelqu'un pouvait m'aiguiller car je patauge un peu avec ce TP...
Je vous joins le protocole :
Nous étudions l’effet du Rituximab sur la survie de deux lignées tumorales : SUDHL6, une lignée de lymphome et U266, une lignée de myélome.
Expérience :
- Les deux lignées ont été cultivées dans des plaques de microtitration 96 puits dans un milieu de
culture complet contenant 10% de sérum de veau fœtal.
- A ce milieu de culture complet, ont été rajoutés : (1) différents pourcentages de sérum humain (SH),
(2) du Rituximab ou un anticorps (Ac) contrôle.
- Les cellules ont été incubées pendant 1h à 37°C dans ces différentes conditions.
- Au bout d’1h, 20µl de MTS (voir fiche technique) ont été rajoutés dans chaque puits et les cellules
ont été incubées pendant 3h supplémentaires. Au bout de 3h, l’absorbance dans chacun des puits a
été mesurée à 490 nm au spectrophotomètre.
Merci d'avance !
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