Histologie: coupe de muscle sur lame

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Bonjour, Je dois faire des coupes de muscle marinés dans un bain 3M et 5M de NaCl, donc très salé. coupes réalisées avec un cryostat. Je n'arrive pas à coller les coupes sur les lames elles restent sur la plaque de pression du cryostat. J'ai essayé de modifier la température, la vitesse de coupe,... Quelqu'un connait la technique de tremper les lames dans un bain de gélatine et de laisser sécher la lame avant d'y apposer la coupe ? Et quelle serait la concentration de gélatine ? Merci d'avance
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[Flyingbike]

quel type de lame utilisez vous ?

quelle épaisseur de coupe ?

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Les coupes font 10µm les lames sont en verre simple et des superfropst +

[Flyingbike]

Vous avez de l'expérience avec d'autres tissus ? vous êtes sur que le problème est lié au fait que le tissu est traité particulièrement ? Si c'est lié au traitement au NaCl, c'est pas facile de vous aider.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitec0a758c1]

Merci pour votre réponse. Je suis encore assez novice en histologie, j'étais biochimiste. Je ne coupe que du muscle ( pour l'instant) de porc ou de poulet. Les échantillons témoins et ceux peu dosés en sel se sont coupés très facilement. Les coupes vont être colorées avec HES. Le sel est surement un facteur aggravant puisqu'il faut que je descende la température. On m'a parlé de tremper les lames dans un bain de gelatine ...

[Flyingbike]

la gélatine peut améliorer la tenue sur la lame, mais probablement pas l'accroche initiale. Normalement les Superfrost + sont faites pour cela.

Si vous voulez essayer, c'est 0.1-0.5% gélatine.


A quelle température êtes vous descendu ?

[invitec0a758c1]

habituellement je coupe avec une température de -20 pour l'enceinte et le porte objet et là j'ai fait des essais jusqu'à -27, plus froid la coupe se déchire. La coupe se fait bien mais dès que je relève la lame anti roll elle se colle sur le métal;

[invitec0a758c1]

j'essai avec votre proposition de concentration de gélatine.
Merci beaucoup

[Flyingbike]

habituellement je coupe avec une température de -20 pour l'enceinte et le porte objet et là j'ai fait des essais jusqu'à -27, plus froid la coupe se déchire. La coupe se fait bien mais dès que je relève la lame anti roll elle se colle sur le métal;

je n'ai pas d'expérience à des températures plus basses


Le tissu est il fixé ? vous n'avez pas la possibilité de dessaler avant coupe ?

[invitec0a758c1]

C'est justement ce qu'on veut voir : la dégradation (ou pas) du tissu à différentes concentration de sel. Les blocs de muscles sont fixés après traitement avec de l'isopentane refroidi avec de l'azote liquide, puis stockés à -80. Le problème vient peut-être de la aussi, les blocs de muscles ont été préparés en mars 2019.