Tp culture cell

[invite2b693771]

Bonsoir Il est demandé de réaliser les ensemencements de sorte que la confluence initiale, c’est-à-dire après attachement et étalement des cellules, soit de 15% dans chacun des puits.
Donner la méthode pour réaliser un tel ensemencement sachant que l’ensemencement des cellules dans les puits de la plaque 4 puits sera effectué, au final, en prélevant 700mL de la suspension cellulaire obtenue à partir de la flasque de 12,5cm2 pour ensemencer 1 puits (flasque à 100% de confluence).

Un protocole conventionnel d’ensemencement intègre le nombre de cellules ensemencées dans chacun des puits.
Si l’on considère que les cellules utilisées ont pour dimension L=50 mm et l=20 mm, donner le nombre de cellules correspondant aux ensemencements réalisés ici.

Bonjour je n’arrive pas je comprend rien pouvez vous m’aider s’il vous plaît
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[Flyingbike]

ben, pour faire simple, imaginez que vous avez du carrelage (cellules) dans une pièce de 12,5cm2 (flasque), qui recouvre toute la pièce (100% de confluence).

On vous dit qu'en prenant une partie de ce carrelage (700µL, j'imagine, plutôt que 700mL), on veut recouvrir 15% d'une autre pièce (les 4 puits).

Par contre, là ou je ne comprends pas l'énoncé, c'est que vous n'avez pas les dimensions de ces puits, et que "50mm x 20mm" ne sont pas des dimensions de cellules, comme vous l'écrivez.


On commence par vérifier l'énoncé ?

[invite2b693771]

Merci de m’avoir répondu si rapidement. Les dimensions sont celles des cellules mais il me semble que le puit fait 21,8 cm2

[invite2b693771]

1,9 pardon

[A voir en vidéo sur Futura]

[Flyingbike]

il faudrait s'en assurer, mais ça a l'air d'être ça.

Pour les cellules, vérifiez, je doute qu'une cellule de 50mm rentre dans un puits de 1,9cm2...


Donc, on reprend l'histoire du carrelage.

Vous avez 12,5cm2 couverts à 100%. Vous voulez couvrir 4x1,9cm2 à 15%. Quelle est donc la proportion de carrelage que vous devrez utiliser ?

[invite2b693771]

La proportion est de 0,60 ?

[invite2848807e]

Bonjour,
Je fais également ce TP.
Il y a actuellement 3 questions qui me posent problème. Pouvez-vous m'aider?

Pour ce TP, il est demandé quels sont les conditions de densité cellulaires souhaitables tout au long de l'expérience? Je ne comprends pas comment il est possible de les déterminés.

Il est aussi demandé de calculer le nombre de ml dans lequel on devra mettre le culot de cellules afin d'obtenir une confluence a 15%? Le culot de cellules est obtenus avec les différents traitements fait (dont un avec la trypsine pour "détruire" les jonctions adhérentes) sur les 12,5 m² de la flasque. Les 700 µL correspond à la quantité prélevée dans la solution contenant le culot de cellules et les x ml de milieu complet. Ces 700 µL sont ensuite mis dans un seul puits. D'après ce que vous dites (si j'ai bien compris) pour obtenir une solution avec 15 % de confluence il faudrait prélever 1,875 m² de la culture et la mettre dans 1 ml de milieu complet?

La troisième question nous demande de calculer le nombre de cellules qu'il y a dans ces 700 µL sachant que chaque cellule fait 50 µm*20 µm donc 1000 µm². Nous aurions donc 125 cellules dans les 12,5 cm² a confluence 100 %. (12,5*10^-4)/1000 =125 cellules. Et je n'arrive pas à aller plus loin du fait que je n'arrive pas à trouver le x mL de milieu intérieur de la question d'avant.

Pouvez-vous me donner des pistes de réflexions s'il vous plait? Je suis vraiment perdu...
Merci beaucoup pour toute réponse.