Plasmide : gel d'agarose

[Shile]

Bonjour,

J'ai effectué une digestion enzymatique d'un plasmide inconnu afin de le comparer à une carte de restriction.

J'y ai 3 conditions :

ND : non-digéré
EcoRI : digestion par l'enzyme EcoRI
Eco-Xho : digestion par les enzymes EcoRI et XhoI

Je sais que mes plasmides ont été contaminé par des sels et solvants organiques

Cependant je ne comprends pas pourquoi il y a à chaque fois 2 bandes aux alentours de 2400pb et 2100 pb ?

Je me suis dit que
- pour la condition ND : il y a des formes superenroulées, c'est pourquoi il y a une bande à 4500pb
- mon plasmide ne contient pas de site de restriction pour EcoRI car les bandes de ND et EcoRI sont les mêmes
- Il y aurait donc juste un site de restriction à XhoI aux alentours de 700pb de mon plasmide

Pourriez-vous m'aider et me dire si ce que je dis est juste ? Merci


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[Flyingbike]

Ce que vous dites est juste mais le gel est sujet à interprétation.

On distingue une bande à 0,8 en double digestion. Paradoxalement la taille du plasmide ne varie pas.
Le doublet est également embêtant. Je m’interroge sur l’origine du matériel

[Shile]

Se pourrait-il que le doublet sur chaque conditions soit dû à une contamination par sel / solvant ?

Malheureusement je ne sais pas d'où vient le matériel, il m'a été donné afin que je fasse l'expérience de moi-même

[Flyingbike]

Je ne pense pas, vous avez vraiment deux entités assez proches mais distinctes.

PS : il est d'usage que le PM soit sur le même gel et non sur un montage. En publication ça ne passerait pas

[A voir en vidéo sur Futura]