Chromatographie d'immuno-affinité et interaction épitope/paratope

[Lowick1]

Bonjour à tous,

Je prépare actuellement un oral sur le rôle des glycoprotéines au sein de l'organisme ainsi qu'un moyen de les extraire: la chromatographie d'immuno- affinité. J'ai compris le principe général de la méthode qui consiste en la fixation des épitopes des glycoprotéines sur les paratopes des anticorps monoclonaux, néanmoins, je n'arrive pas à trouver la nature des interactions chimiques entre les sites de fixation ainsi que la méthode par laquelle les anticorps sont fixés au support, enfin, je ne trouve pas non plus le principe de la désorption des glycoprotéines.

Merci d'avance !
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[tRNA]

Bonjour Lowick1,

La reconnaissance antigène-anticorps ou épitope-paratope se fait par des liaisons non-covalentes (liaisons hydrogènes, liaisons électrostatiques, forces de Van der Waals et liaisons hydrophobes).

Les anticorps doivent être fixé au support de chromatographie de manière covalente. Je ne sais pas à quel point tu veux des explications dans le détail, mais en gros les anticorps ont des éléments dans leur structure que l'on peut faire "réagir" dans des conditions particulière avec le support pour former des liaisons covalentes. Ca s'appelle l'immobilisation (et ça se fait en amont de le chromatographie). Et je précise, l'anticorps est immobilisé par son "fragment constant" (la partie commune à tous les anticorps) ce qui laisse son site de reconnaissance des antigènes (paratope) disponible.

Pour la désorption, c'est à dire décrocher les glycoprotéines, il suffit de changer les conditions de pH/sels du tampon de manière à empêcher les liaisons non-covalentes.

Souvent la chromatographie d'affinité se passe dans une colonne (un tube) contenant un support (par exemple une résine inerte sur laquelle ont été immobilisé des anticorps). Dans un premier temps tu fais passer ta solution à purifier (contenant les glycoprotéines) dans la colonne, et les glycoprotéines sont reconnues par les anticorps (immobilisés) et donc retenues dans ta colonne (à condition que ta solution de départ soit favorable pour la formation des liaisons covalentes!). Ensuite on peut faire passer un tampon particulier (pH/sels) qui empêche les liaisons non-covalentes et donc entraine le "décrochage" de ta protéine. En pratique, on fait souvent un gradient où on augmente la "stringence" de ce tampon de manière à trouver les conditions nécessaires et suffisantes pour la désorption.

En espérant que c'est clair ^^, Bonne chance pour ton oral!

[Lowick1]

Bonjour tRNA,
C'est très bien expliqué, merci beaucoup pour ta réponse !!!