Tampon de dialyse

[Mv75011]

Bonjour,

Dans le cadre de mon stage, j'ai été amené à réaliser une dialyse pour purifier mes protéines de l'imidazole. Pour cela j'ai utilisé un tampon de dialyse dont la composition était la suivante (2L):

100mL de NaCl 4M
62.5mL de TrisHCl pH7.9 -1,6M
666mL de glycérol
17.42g d’arginine
14.7g d’acide glutamique
1171.5mL d’H2O


Auriez vous une idée de l'utilité des différents composants : le NaCl (alors que l'on doit justement créer un gradient de concentration), le glycérol, l'arginine et l'acide glutamique ?

Merci
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[tRNA]

Bonjour,

Pour plus de précisions, il me faudrait la composition de ton tampon d'élution.

Mais de manière générale, je pense que le but principal de la dialyse dans ton cas est de se débarrasser de l'imidazole présent dans tes fractions d'élution (et qui a servit à décrocher ta protéine His-tagguée de la résine nickel).
Donc tu as bien un gradient de concentration en imidazole: avec une concentration surement élevée dans tes fractions d'élution de la protéine, versus 0 dans ton tampon de dialyse. Le principe de la dialyse c'est que l'imidazole étant une petite molécule, elle peut passer à travers les pores du sac de dialyse (contrairement à ta protéine qui est prisonnière) de façon à ce que les concentrations en imidazole s'équilibrent à l'intérieur et en dehors du sac de dialyse. Ça provoque donc une dilution importante de l'imidazole présent dans ta solution de protéine; pour atteindre une concentration négligeable (ce que tu souhaites).

Le reste des composants de ton tampon sont en général choisis en fonction des caractéristiques de ta protéine pour la conserver au mieux. C'est à dire que tu choisi un pH, un concentration en sels, etc qui préserve la solubilité de ta protéine et son éventuelle activité. L'arginine et l'acide glutamique sont surement des cofacteurs de ta protéine qui contribuent peut-être à sa stabilité (?)
Le glycérol est un agent de conservation cryoprotectant qui permet de préserver l'intégrité de ta protéine et sa solubilité, particulièrement quand tu la stockes de manière (+ ou -) prolongée au froid (souvent à -80°C).

En espérant t'avoir éclairé un peu!

[Mv75011]

Bonjour tRNA,

Je te remercie pour les précisions qui me sont d'une grande aide. A vrai dire, tu m'enlèves une des nombreuses épines que j'ai au pied.

Un grand merci