[Biologie Moléculaire] Pcr
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Pcr



  1. #1
    Myriam 1

    Unhappy Pcr


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    Bonjour
    S'il vous plait si i y a quelqu'un qui peut m'aider à propos de mon PCR je sais pas pourquoi elle ne marche pas et je n'ai pas compris est ce que le probleme est de ADN ou bien des primers !!! d'abord j ai utlisé des primers à une concentration de 10uM et une quantité d'ADN par réaction PCR de 40ng les Ct sont tres elevées donc j ai pensé à augmenter plus la concentration cible de 50ng/ul et ausii d'augmenter le quantité d4ADN de 50ng mais c'est la meme chose Il y des fluctuations au début des courbes de fusions je ne sais pas est ce que c'est un probleme de pipettage est ce que l'ADN est contaminé est ce que je dois diminuer la concentration des amorces. Je ne pas compris est ce que ce sont des dimeres ou des amplification non speacifiques !!!

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  2. #2
    Flyingbike
    Responsable des forums

    Re : Pcr

    Pour debugger de la PCR il faut de la méthode
    -avez vous une autre cible qui fonctionne ?
    -quelle est la matrice ? De l’ADN génomique? Des cDNA ?
    -d’où sortent les amorces ?
    -sont elles vérifiées in silico?
    -quels sont les conditions réactionnelles (en concenrtration FINALE)
    - quelles conditions de run ?
    La vie trouve toujours un chemin

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