Efficacité colonne HPLC

[invite4c317612]

Bonjour a tous

J'ai un petit probleme de choix de colonne HPLC pour séparer deux composés:
j'ai une colonne 150*3 mm - 3 µm de granulométrie, et une colonne 250*4.6 - 5µm.
résultats de séparations:
- pour la colonne 150*3:
Résolution = 1.3
sélectivité = 1.01
TR = 10.22 et 10.42
N = 74274 plateaux thériques
HEPT = 0.002 mm
- pour la colonne 250*4.6:
résolution = 1.24
selectivité = 1.03
TR = 7.07 et 7.26
N = 27673 plateaux thériques
HEPT = 0.009 mm

j'ai déja choisi la colonne la plus longue, mais après avoir fait les calculs, je me suis rendu compte que j'ai peut être fait le mauvais choix, celle que j'ai choisie a moins de plateaux théorique et la HEPT est plus grande.
Il me faut maintenant trouver des arguments pour justifier mon choix, sachant que j'ai quand même un temps d'analyse plus court et une sélectivité meilleure.
J'ai besoin d'aide s'ils vous plait.
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[HarleyApril]

Bonsoir

Si tu as beaucoup d'analyses à faire, le temps de run est un paramètre important.

cordialement

[invite1758cdad]

Est ce un exercice sorti d'un livre ou vraiment une mise en application de laboratoire ?

perso c'est expérimental et par habitude, pas de calcul théorique ou si peu..

Si c'est le second cas, il faut considérer plusieurs autres paramètres :

- quel type de détecteur est utilisé ? Deux composés co-élué peuvent donner des réponses différentes (abs à des longueurs d'ondes différente, ...)
et donc une séparation peut être optimisé en jouant sur les paramètres de détection.

- quel est la nature de la phase stationnaire ?

- quel phase mobile utilisez vous (isocratique, gradient) ? Intéressant de voir le profil de gradient en fonction de l'allure du chromatogramme !

- quel est la capacité de votre système HPLC ? Pression (400Bars; 600Bars; 1000Bars et mode gradient Binaire ou Quaternaire (critère pour définir l’efficacité du gradient "binaire" de toute façon..)

- volume injecté, en fonction de la sensibilité du détecteur ! il est possible de diminuer le volume injecté, tout en restant très sensible, ce qui permet d'augmenter la résolution de manière efficace et simplement.

Pour poursivre il faudrait ces informations, les chromatogrammes, les noms des composés à séparer et les infos relative (spectre uv/vis par exemple ou la fluorescence, ...) et le profil de gradient si il y en a un d'utilisé..

Cordialement.