Bonsoir quelqu'un pourrais m'expliquer cette méthode pour déterminer le pouvoir antioxydant que je la trouve quelques parties flou :
Avec le test utilisé dans la présente étude, le taux d’oxydation est estimé par la méthode colorimétrique au thiocyanate ferrique (FTC) qui permet d’évaluer le taux de peroxydes présents dans le milieu réactionnel. Une absorbance élevée traduit une oxydation importante et par conséquent une absorbance faible signifie une activité antioxydante élevée .
Dans des tubes à essais on met 5ml d’extrait des pelures de tomate (obtenue pour le dosage des polyphénols totaux en utilisant le méthanol comme solvant d’extraction), 0.5ml d’acide linoléique (2.52 %) dans de l’éthanol à 99 %, 1 ml de tampon phosphate (0.05M, pH 7) et 0.5ml d’eau distillée, après une incubation à 40°C, à l’abri de la lumière, on prélève toutes les 24 h un aliquote (100 µl) dans un tube à essai additionné de 3ml d’éthanol à 75%, 100µl de thiocyanate d’ammonium à 30%, 100µl de chlorure ferreux (0.02M) préparé dans de l’acide chlorhydrique 3.5% ; après 3 mn on mesure l’absorbance de la coloration rouge à 482nm, jusqu’à obtention d’une absorbance maximale du témoin. On procède avec les mêmes opérations en remplaçant l’extrait des pelures de tomate, respectivement, par les solutions de l’α-tocophérol et de BHT à 0.01% dans le méthanol .
L’inhibition de l’oxydation des lipides par les antioxydants présents dans les pelures de tomate, par l’α-tocophérol et par le BHT est exprimée en pourcentage selon l’équation suivante : % d'inhibition de l'oxydation de l'acide linoleique = 100-[ A1(t=96h)/A0(t=96h)]x 100
Soit A0 est l’absorbance du témoin et A1 est l’absorbance de l’échantillon à tester après 96 heures d’incubation à 40°C.
comment on prepare 0.02M de chlorure ferreux dans l'acide chlorhydrique 3.5%.
qu'est qu'il désigne par l'absorbance du témoin A0
pourquoi on fait un prélèvement chaque 24 h alors que le résultat final concerne seulement l'absorbance aprés 96 heures???