slt à tous!
j'ai un soucis: en fait j'aimerai savoir s'il est possible de colorer une protéine, comme on colore l'adn avec du cy5 par exemple!
en fait je fais un band shift( interaction adn-proteines) sur gel d'acrylamide; pour l'une de mes protéines je veux savoir si elle fait partie du complexe vu que pour l'autre c'est confirmé. alors cmt faire pour verifier la présence de cette protéine dans le complexe? j'ai essayé des choses mais ça ne donne pas grand chose!
merci!
Bonjour.
Je ne garantis la justesse de mes propositions, mais une protéine couplée à la GFP ne ferait pas l'affaire.
Ou alors un anti-corps contre ta protéine d'interet.
Ou alors un ELISA.
Ou alors une chromato.
Et pourquoi pas récuperer ton supposé complexe, tu sépares tout le monde et tu fais un western blot pour mettre en évidence ta protéine, si tu connais la taille.
Après je ne sais pas si c'est réellement réalisable, c'est juste des propositions.
alors ce qui se passe c'est que c'est une protéine qui semble interagir avec de l'adn via une autre proteine d'après ce ke jai déja obtenu! ce que j'ai fait c'est faire migrer le complexe, puis j'ai découpé le gel au nivo de la bande correspondant au complexe. j'ai broyé le gel( difficilement) et g l'ai fait migrer sur un gel de protéines Tricine sds. ensuite j'ai fait un western blot avec un anticorps dirigé contre la protéine, et jai bien identifié la protéine d'interet sauf que c'est très moche comme résultat à présenter! ce que j'ai fait d'autres c'est transferer la portion du gel ( band shift)correspondant à mon complexe sur une membrane et j'ai fait un west blot. et là rien!!! apparament c'est difficile de transferer les protéines!
de ce fait j'aimerai savoir ce que je peux faire d'autres pour avoir klk chose de clean svp!
Bonjour,
il est vrai que je n'ai que très peu d'expérience pratique, aussi je pense que tu peux aisément poser ta question en dehors de la section exercice.
Sinon il semblerait ( d'après moi ) qu'il y ait deux étapes limitantes : la purif lorsque tu découpes ton gel et ton transfert.
N'est-il pas possible de purifier un peu ton extrait après découpe ?
Ce que tu trouves moche, c'est quoi exactement ? Parce que si c'est un "paté", il n'y aurait pas moyen de sélectionner ce pâté et de le faire repasser avec plus de précision ?
