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Nitrate Reductase ( physiologie végétale )



  1. #1
    Charles-Henri

    Nitrate Reductase ( physiologie végétale )


    ------

    Bonjour, je suis bloqué sur un exercice ( j'étais absent au TD et je précise, pas par flemmingite aigue ), et comme je l'ai précisé l'exercice est sur la nitrate reductase ( au niveau du cycle biogéochimique de l'azote reaction oxydant le NO3- en NO2- via NADPH si je me souviens bien). Dans cette exercice, il est question d'étudier la régulation de cet enzyme en fonction du jour et de la nuit. On nous dit que des plants de tabac sont cultivés sur un milieu riche en nitrates et placés en chambre de culture avec un rythme de 8h de jour et 16h de nuit. Ensuite, au bout de 5 jour d'acclimatation a cette photopériode, on prélève des plants de tabac toutes les deux heures et on prépare des extraits de feuille bruts, et grâce a ça on mesure l'activité de la nitrate reductase et on fait un Western-Blot pour la détecter.
    On trace une courbe : Activité de la NR = f(Temps) et on obtient un pic de l'activité pendant les 8h de jour et une forte baisse durant les 16h de nuit.
    1) On arrive a ma première question, ( il était temps ) est-ce que la lumière est le seul facteur influençant la régulation de la NR ( en général )? Que peut-on dire d'une telle courbe ?
    2) Et aussi, quelle autre experience on peut proposer pour connaître le niveau de l'activité de la NR ? Une autre courbe avec les taux de ARMm de la NR et des taux de glutamine en fonction du temps ? un Northern Blot ? J'avoue ne pas savoir...
    Merci en tout cas pour ceux qui répondront

    -----

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  3. #2
    Charles-Henri

    Re : Nitrate Reductase ( physiologie végétale )

    J'ai pas respecté les règles ou quoi ? Pourtant j'estime avoir donné les pistes qui me semblaient correctes, j'esperais juste être éclairé.

  4. #3
    LXR

    Re : Nitrate Reductase ( physiologie végétale )

    Tu les a respectées mais ton sujet est assez précis et d'un niveau déjà spécialisé donc moins de chance de trouver une personne qui ait les compétences pour te répondre.

    Greg

  5. #4
    fabien.che

    Re : Nitrate Reductase ( physiologie végétale )

    Bonjour,

    Citation Envoyé par Charles-Henri Voir le message
    2) Et aussi, quelle autre experience on peut proposer pour connaître le niveau de l'activité de la NR ? Une autre courbe avec les taux de ARMm de la NR et des taux de glutamine en fonction du temps ? un Northern Blot ? J'avoue ne pas savoir...
    Merci en tout cas pour ceux qui répondront
    Il faut bien avoir en tête que les quantités d'ARNm et/ou de protéines ne reflètent absolument pas l'activité de la protéine en question.

    Je ne connais pas cette enzyme, mais le moyen le plus simple pour estimer l'activité de la protéine est de doser le produit de la réaction (éventuellement le substrat).

  6. #5
    Charles-Henri

    Re : Nitrate Reductase ( physiologie végétale )

    Citation Envoyé par fabien.che Voir le message
    Bonjour,



    Il faut bien avoir en tête que les quantités d'ARNm et/ou de protéines ne reflètent absolument pas l'activité de la protéine en question.

    Je ne connais pas cette enzyme, mais le moyen le plus simple pour estimer l'activité de la protéine est de doser le produit de la réaction (éventuellement le substrat).
    Comme je ne savais pas, j'ai proposé des techniques vues en cours ou que l'on retrouve dans mon fascicule de TD, donc sachant que la réaction est :

    N03- + NADPH -----------> N02- + NADP+ , selon toi je devrais doser le N02- ? Et j'en déduirais la régulation de l'enzyme au jour et a la nuit ?

  7. A voir en vidéo sur Futura

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