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Transgénèse végétale par Agrobactérium



  1. #1
    _Marionet

    Transgénèse végétale par Agrobactérium

    Bonjour, j'ai un petit souci pour rédiger mon compte rendu de TP en physiologie végétale. Nous avons réalisé une transformation stable de disques foliaires via Agrobactrium tumefaciens dans des plants de tabac (ainsi que des protoplastes etc..) mais mon souci est que je ne cOMPRENDS PAS pourquoi il faut faire une préculture d'Agrobactéries avant de faire pousser la culture qui sera utilisée lors du TP(cf séance 1, J-4 et J-2) sinon je pense avoir les données nécessaires pour faire mon compte rendu(j'espère...) Je me demande si ce n'est pas pour préparer les agrobactéries à la kanamycine et leur conférer ainsi la résistance à cette antibiotique. Les faire pousser en présence de kanamycine pour qu'elle développent une résistance?J'ai mis le protocole du TP entier car je ne pouvais pas le tronquer, mais seul le début est nécessaire pour mon problème.

    -----

    Fichiers attachés Fichiers attachés

  2. #2
    nana4

    Re : Transgénèse végétale par Agrobactérium

    salut,
    la pièce jointe n'est pas encore validé
    il faut jeter un coup-d'œil sur le TP
    vous n'avez pas une idée sur la préculture d'agrobacterium (je veux dire avec quoi a été placé ?)
    si non peut être pour obtenir une culture pure

  3. #3
    _Marionet

    Re : Transgénèse végétale par Agrobactérium

    La partie intéressante du protocole:
    "J-4 (ces manipulations seront effectuées par les enseignants)
    Prélevez une colonie isolée à partir d’une boîte de Pétri (LB agrobacterium+ kanamycine (50 mg/l) à l’aide d’un cure dent stérile.
    Ensemencez 5 ml de milieu liquide LB + kanamycine (50 mg/l). Faire pousser à 28°C pendant 24h sous agitation (200 rpm).
    J-2 (ces manipulations seront effectuées par les enseignants)
    Prélever 1 ml de la pré-culture d’Agrobacterium et inoculer 50 ml de milieu liquide LB agrobacterium contenant de la kanamycine (50 mg/l). Faire pousser à 28°C pendant 48h sous agitation (200 rpm)."


    C'est une très bonne idée la cullture pure merci!...malheureusement je n’ai pas pu suivre le module de microbiologie l'année dernière donc tt ce qui est ptite bébêtes je suis un peu perdue...heureusement la bio mol rattrape un peu les lacunes. Bref, on a du travailler ss hottes, instruments stériles et tt et tt donc appel aux gens: qu'en pensez-vous:
    H1: induire une résistance à la kanamycine?
    H2: obtenir une culture pure?

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