Bonsoir à tous,

J'ai du mal à répondre à quelques questions d'annales de l'UE Techniques de biochimie du 2ème semestre de licence 2 de biologie. Les voici

1. La réaction enzymatique de la SPL (Sphingosine-1-Phosphate Lyase) est effectuée à partir d'extraits tissulaires de souris. Les organes de la souris sont broyés puis lysés mécaniquement dans 100mL de solution tampon ayant la composition suivante : 5mM MOPS (3-N morpholino propanesulfonic acid) ph 7.6, 1mM DTT, 10% Glycérol. Les composés mis à la disposition des expérimentateurs pour effectuer cette solution sont les suivants :

- Du MOPS en poudre : Poids moléculaire=209.3 g/mol ; pKa=7.2
- Une solution de DTT à 0.5M
- Une solution de glycérol à 50%

a) Calculer
- La masse de MOPS à peser
- Le volume de NaOH ou HCl à 1M pour préparer la solution tampon à pH 7.6 en justifiant par une phrase quel réactif vous choisissez (HCl ou NaOH)
- Le volume de DTT
- Le volume de glycérol

Nécessaires pour la réalisation de cette solution tampon. (malgré les multiples explications des professeurs j'ai encore du mal avec les calculs tenant compte du pH ou d'une concentration donnée en pourcentage, je n'ai pas eu de problème pour le DTT).

2. Afin de réaliser le test d'activité enzymatique de la SPL, les auteurs (ce sujet est tiré d'un article scientifique ndlr) doivent au préalable purifier le substrat radioactif [3H]-DHS1P qui s'avère être "contaminé" par des impuretés et des dégradations. Pour ce faire, ils choisissent d'effectuer une chromatographie d'interactions hydrophobes (de type C18) dont la phase mobile est le solvant méthanol/eau/tétrabutylammonium-dihydrogen phosphate dans les rapports de volume 84.4/15/0.9. Ils déposent sur la colonne 200 pmoles de DHS1P non radioactif et 2.106 dpm de [3H]-DHS1P (activités spécifiques=0.25 µCi/nmole, 1 mCi/mL)
Pour rappel, 1Ci=2.22*1012 dpm.

a. Déterminer le volume de [3H]-DHS1P que les auteurs doivent déposer sur la colonne C18.


Voilà c'est à peu près tout avec les réponses à ces questions je pense pouvoir me débrouiller pour le reste des annales à retravailler !

Merci d'avance pour l'attention portée à ce post et aux éventuelles réponses données.

@ très bientôt.

Blondie_Cerise