génetique aidez moi svp c ' urgent

[kikomimo]

bonjour
vous venez purifié à partir d'un plasmide un fragment d'ADNc de 1 kB digéré par XHOL et le plasmide PGEX de 5 kb digéré par Xhol et dé-phosphorylé .afin d’évaluer la quantité des ADNs purifiés vous réaliser sur gel d'agarose avec 5µl de chaque fragment .grâce au marquer de taille utilisés vous estimez la quantité déposée à 30ng pour l'insert et 50ng pour le vecteur .
Question 1 : calculer en justifiant la quantité d'insert nécessaire pour le lier à 50 ng de vecteur avec excès molaires d'insert de 3 fois par rapport au vecteur ?
question 2:dans quel volume minimum vous pouvez réaliser la ligation en utilisant 1µl de ligase et un tampon stock 5X:10,15 ou 20 µl ?justifiez votre réponse ?
merci de vos réponse
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[albanxiii]

Bonjour,

Si c'était vraiment urgent, vous auriez posté au bon endroit, là où je déplace votre post.

Pour la modération.

[Cendres]

Bonjour,

Un rappel à lire: http://forums.futura-sciences.com/ex...-exercice.html

[kikomimo]

je suis nouvelle sur le site et j'ai aucune idée pour les règlements
voila mon essaie :
pour calculer la quantité d'insert :
3x(1/5)x50 =30ng
et pour la question 2:
Après avec la question 1a j' ai calculé la quantité (en micro litres) d'insert et je dois déduire celle du vecteur et avec ça je peux déduire le volume minimum dont j'ai besoin

[A voir en vidéo sur Futura]

[JPL]

Pourtant en t'inscrivant tu as certifié avoir lu la charte du forum. D'autre part il est élémentaire de lire la liste des forums pour trouver le bon, et enfin de regarder dans les messages importants en tête de chaque forum s'il n'y en a pas un qui pourrait concerner ta demande.

[Yoyo]

Salut

Ton calcul est faux car tu n'as pas converti en mol. Le problème est qu'a quantité egale tu n'as pas le meme nombre de molécule si elle fait 5kb ou 2kb.
Pour ta deuxième question on te dit que ton tampon est 5X, comme il doit être 1X final cela signifie qu'il faut le diluer 5 fois. EN fonction du volume d'insert et de plasmide il risque d'y avoir des impossibilités.

Yoyo

[kikomimo]

alors pour la quantité d'insert : massa d'insert /(660*taille d’insert ) =5.54 *10^-11 moles ??

et je suis toujours bloquée pour la 2éme question
e j'ai une autre question
pour préparer une solution de 10ml contenant 2M de diethanolamine , 1x PNPP et 0.1% triton à partir de solution stocks 10M diéthanolamine , 10% triton et 100x PNPP?
POUR diéthanolamine j' trouve un volume de 2ml en utilisant la formule ci*vi=cf*vf et pour triton 0.1 ml et je m'en sors pas avec PNPP quelqu’un pourra m aider svp et es mes calculs sont just