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Sequence d'une amorce pour PCR

  1. joananaf

    Date d'inscription
    février 2006
    Messages
    2

    Smile Sequence d'une amorce pour PCR

    Bonjour,
    Je fais actuellement un stage et je ne comprends pas la séquence de mon amorce pour la PCR, pouvez vous m'aider?
    Voici la séquence de mon amorce: 5? CTC GTC CTC GAG TTA ATG GTG GTG ATG GTG GTG GCC GGA GCC GCG GGG CAC CAG CTC TGT GGC GTG GGA GGC-3?
    Sachant que les 6 derniers codons se fixeront sur l'ADN
    Il y a 6 codons pour l'histidine, avec 2 sortes de codons pour l'ARNt, pour ne pas qu'il soit "saturé".
    Je sais qu'il y a aussi un codon stop et si je ne me trompe pas les codons apres le codon stop servent à maintenir l'ARN polymerase (oui ou non????).
    Ma question est pourquoi il y a t-il 7 acides aminés entre les codons qui vont se lier à l'ADN et les 6 His? A t'on choisi des acides aminés particuliers pour l'après codon stop?
    Merci à ceux qui me répondront!


     


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  2. t0yt0y

    Date d'inscription
    février 2008
    Localisation
    78
    Âge
    26
    Messages
    492

    Re : Sequence d'une amorce pour PCR

    Je n'ai pas de code génétique sous la main pour voir à quoi correspond ces codons, mais je dirais que ton expérience ressemble très fortement a une mutagénèse dirigée avec insertion d'une séquence particulière grace a la PCR.

    L'étiquette histidine est souvent, quant à elle, utilisé pour faire des banques génomiques et de retrouver un fragment particulier.

    Il faut voir aussi si les codons introduits ne correspondent pas a un site de restriction pour ensuite introduire ton fragment PCR dans un vecteur.
     

  3. piwi

    Date d'inscription
    janvier 2005
    Localisation
    Strasbourg
    Âge
    37
    Messages
    7 857

    Re : Sequence d'une amorce pour PCR

    Le but de ta PCR ne serait il pas de produire ta protéine taguée et d'étudier ses interactions avec d'autres protéines?
    Le but du linker est de maintenir une certaine souplesse dans le lien entre tes histidines fixées et ta protéine afin qu'elle puisse bouger et fixer convenablement d'éventuels interactants.

    5' CTC GTC CTC GAG TTA ATG GTG GTG ATG GTG GTG GCC GGA GCC GCG GGG CAC CAG CTC TGT GGC GTG GGA GGC-3'
    Il y a là un site XhoI pour permettre un clonage.
    J'imagine que ton oligo antisens doit aussi porter un site de restriction

    Les 6 autres nucléotides sont classiquement ajoutés pour permettre à l'enzyme de restriction de couper (ce sont des endonucléases).

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
     

  4. MaliciaR

    Date d'inscription
    août 2007
    Localisation
    Europe
    Messages
    3 401

    Re : Sequence d'une amorce pour PCR

    Pour pas répéter ce qui a déjà été dit, je vais juste rajouter que sans regarder à quelle séquence tes oligos vont s'hybrider, il est de l'ordre du divinatoire de te donner des indications supplémentaires

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.
     

  5. rivierad

    Date d'inscription
    janvier 2013
    Messages
    15

    Re : Sequence d'une amorce pour PCR

    PCr.jpg

    Voilà demain j'ai examen de bio mol et un exo sur PCR va tombé en temps normal je m'en sort mais là il y une boite tata -10 et une boite -35 qui me gène


    pourriez vous me résoudre l'exercice ce serai hyper cool je suis trop en galère



    Merci à vous
     


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