Migration Western Blot

[invitec718404f]

En effet c'est vraiment laid! La première fois que je vois ça... Vous avez quoi comme cuve de migration et générateur?
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[Flyingbike]

quel est l'intensité moyenne lors de la migration ?
tu n'as pas oublié de diluer ton tampon de migration ?

[ratafouin]

Le système de migration c'est des mini cuve de chez BIORAD idem pour les générateurs (j'ai testé les 3 que j'ai).

Le tampon de migration est stocké en 5x et bien dilué à 1x final pour utilisation.

J'avoue que lors des migration je ne regarde pas vraiment l'ampérage mais ma collègue à le même système de cuve et on partage les générateurs et elle n'a pas ces soucis...

[invitec718404f]

Normalement du t'en fout de l'ampérage tant que tu es en volts contants.

[Flyingbike]

ben non, c'est une indication par rapport au bon fonctionnement du système. Et puis moi par exemple je migre en intensité constante

[invitec718404f]

En intensité constante ton voltage varie alors tu dois avoir des surprises au niveau de tes temps de migration.

[Flyingbike]

non, pourquoi ?

en tension constante ton intensité varie aussi vu que la résistance n'est pas constante. La migration doit aller de moins en moins vite, non ?

[invitec718404f]

A priori c'est le voltage qui fait migrer et pas l'intensité, c'est à dire la tension entre le plus et le moins et pas la quantité d'ions.

Donc à tension constante vitesse de migration constante.

[ratafouin]

J'ai refait des gels encore une fois.
L'ampérage moyen est d'environ 30mA durant la migration.

J'avouerai que ça commence sévèrement à me désespérer cette histoire

[Yoyo]

salut

Change de cuve
Nous ca a résolu pas mal de probleme de migration!

Sinon prends les solutions de ta collegue qui n'a pas de probleme pour faire tes gels et regarde ce que ca donne. Si c'est toujours moche alors ca viens de tes échantillons qui sont peut etre trop salins.


YOyo

[ratafouin]

J'ai déjà testé une autre cuve sans succès.
J'ai refait les tampon 2 fois sans succès.
J'ai testé les tampons de ma collègue sans succès.
J'ai refait le tampon d'échantillon 2 fois sans succès.
Idem avec le tampon d'échantillon de ma collègue.

Pour les sels je vois pas d'ou ils peuvent venir car même avec de la BSA purifiée j'ai le soucis ainsi qu'avec des culots de cellules repris dans du tampon d'échantillon...